免疫亲与柱净化、在线电化学衍生化高效液相色谱法检测花生中的黄曲霉毒素.pdfVIP

LC一038 免疫亲和柱净化、在线电化学衍生化高效液相色谱法 检测花生中的黄曲霉毒素 张鹏 张艺兵赵卫东李寅宾 (山东进出LJ商品检验局二处青岛266002) 1 前言 黄曲霉毒素(AFT)是一组由黄曲霉和寄生曲霉等所产生的毒性代谢产物”’，易在田问 及储存过程中污染花生、玉米、麦类等农作物，存在形式为B，，82，G，，G：。由于黄曲 霉毒素具有强致癌性，因此在世界各国都受到限量控制。1998年7月16日欧盟通过了是 新指令“，加强对食品中黄曲霉毒素的限量要求，并于1999年1月1日起在各成员国强 制实施。其中在花生等食品中AFT的限量为：Bl(2x1o-9，总量(B，+B2+Gl十G2)4×10一。 近年来．免疫亲和柱(IAc)因其操作简便、特异性高、净化效果好而在国内外得到广 泛应用”1。应用反相高效液相色谱法(HPLc)配荧光检测器检测食品中的黄曲霉毒素，具 有分离好、灵敏度高、快速准确等优点”“。但在上述方法中，对AFT BI和G．的衍生化 多为离线方式或需加泵、控制反应温度等，自动化程度低，不利于批量样品的检测。本文 建立了一种分离测定花生中黄曲霉毒素的RP．HPLc新方法。经检索，国内未见报道。 2实验部分 2．1试剂 甲醇、溴化钾(分析纯)；磷酸盐缓冲液(PBs)(pH 7．4)；乙腈(色谱纯)；浓硝酸；黄 ng，L，溶于矿(苯)：y(乙腈)=98：2中)；水(重 曲霉毒豢标准储备液(AFTBl+B2+Gl+G2各1．0 蒸去离子水)。 22器材与仪器 均质器：免疫亲和柱(AFI，A10xIN 色谱仪(HP1050)：A．04．01．HP化学工作站配荧光检测器(FP920．日本JAscO)：衍生 装置Kobra Ce¨(荷兰LAMBRsPLEUGER)。 23色谱条件 色谱柱：Lichnospherloo，c…5 矿(水)：矿(乙腈)：y(甲醇)_70：15：15，每1L流动相中加入119 mgKBr及100pL浓硝酸 供衍生化用：流速：lm№in：荧光检测器激发波长：360衄，发射波长：440nm；进 样量：100uL：KobmCeu工作条件：100HA。 2．4标准曲线 黄曲霉毒素标准溶液系列：将标准储备液稀释至O．5，3．O，6．0，9．0 ug几．在上述色 G2： 谱条件下进样分析．以峰面积王，比浓度x建立标准曲线。回归方程分别为AFT ，，_60．4 B2：，皂113．32桀2．90， 4．肜卜0．40，严0．9999；AFTGl：弘46．4Qj二1．76，产；0．9999；AFT ，=0．9999；AFT Bl：y_59．32再4．04，产o．9999．4种毒素达到基线分离．保留时间分别为 一98． 2．5样品提取 取50．O g粉碎样品于s00mL三角烧瓶中，加入200mL甲酵／水提取液。以均质器高 速搅拌3min，静置过滤。 2．6免疫亲和柱净化及测定 将塑料针筒连接于EAsI—Ex矸∽cT…免疫亲和柱。吸取2．omL滤液加入针筒并加入 14mL mL／min PBs稀释后，以约5 mL水以约5 mL／min的速度通过免疫亲和柱。取10 的速度冲洗针筒及亲和柱，直至抽干柱中液体。加入4mL乙腈以约3mL，min的速度慢