血管内皮生长因子165基因对人胃癌细胞侵袭性影响.docVIP

血管内皮生长因子165基因对人胃癌细胞侵袭性的影响 　　作者：乐红琴,欧希龙,杭程,陈慧娟　　作者单位：.东南大学医学院附属盐城医院 消化内科，江苏 盐城 224001;2.东南大学附属中大医院 消化内科，江苏 南京 210009 　　【摘要】 目的：探讨血管内皮生长因子165(VEGF165)基因对胃癌细胞侵袭性的影响及可能机制。方法：通过体外培养人胃腺癌细胞BGC823，观察胃癌细胞转染VEGF165基因对其迁移能力及侵袭相关分子MMP2、uPA mRNA表达的影响。应用Millicell小室分析VEGF165转染前后胃癌细胞迁移能力的变化;逆转录聚合酶链反应(RTPCR)研究VEGF165转染前后BGC823的MMP2、uPA mRNA表达变化。结果：迁移实验结果显示AdVEGF165组胃癌细胞迁移能力高于AdGFP组及对照组[(212.000 0±10.148 8) vs (142.666 7±14.502 8) and (148.333 3±7.571 8),P0.05];RTPCR结果显示VEGF165转染后促进了BGC823的MMP2、uPA mRNA表达，AdVEGF165组MMP2、uPA的mRNA水平明显高于AdGFP组及对照组[MMP2 mRNA：(0.664 6±0.048 6)vs (0.409 6±0.066 8) and (0.380 3±0.025 4);uPA mRNA：(0.821 6±0.079 8) vs (0.406 0±0.115 8) and (0.404 3±0.062 0);均为P0.05]。结论：经VEGF165转染后，胃癌细胞迁移能力增强，MMP2、uPA的mRNA表达增加，提示VEGF在肿瘤的侵袭过程中发挥促进作用，MMP2、uPA可能与此作用有关。 　　【关键词】 血管内皮生长因子165; 胃癌; 侵袭; 迁移实验;基质金属蛋白酶2; 尿激酶型纤溶酶原激活物 　　胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，淋巴结转移、血行转移和腹膜种植转移是其最常见的转移方式,预后较差。阐明胃癌细胞侵袭转移的机制,可以为胃癌侵袭转移的早期诊断和靶向治疗提供理论基础。近年来人们已经在人和动物的胃癌组织中发现血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)的过度表达,且其过度表达与肿瘤的侵袭、转移密切相关。为进一步了解VEGF能否通过自分泌途径增强胃癌细胞BGC823的侵袭力及其机制，故设计本实验。本实验通过体外培养人胃癌细胞BGC823，观察BGC823转染VEGF165对其迁移能力及对侵袭相关分子基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases2，MMP2)、尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinasetype plasminogen activator，uPA)分泌的影响，旨在进一步探讨VEGF在胃癌侵袭转移中的作用及可能机制，对胃癌转移和复发的早期诊断及靶向治疗有重要意义。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 　　人胃腺癌细胞株BGC823购自中国科学院，复制缺陷型腺病毒(Ad)重组体AdVEGF165及对照病毒Ad绿色荧光蛋白(GFP)由南京医科大学第一附属医院构建并赠送，RPMI 1640低糖培养基购自美国Gibco brl公司，胎牛血清购自杭州四季青公司。Trizol试剂及RTPCR试剂盒购自日本TaKaRa公司，PCR引物由上海英俊生物技术有限公司设计并合成。 　　1.2 方法 　　1.2.1 细胞培养 BGC823用含有10%胎牛血清的RPMI 1640培养液于37 ℃、5%CO2饱和湿度的培养箱中培养，以0.25%胰蛋白酶消化后进行传代，一般1～2 d传1代，1瓶接种2至3瓶，隔日更换培养液继续培养。 　　1.2.2 病毒转染 实验分成对照组、AdGFP组和AdVEGF165组等3组，以细胞浓度为2.0×105 ml-1分别取3 ml接种于3个培养瓶(50 ml)中，于60%～70%细胞贴壁时吸出原培养液，对照组加入无血清无抗生素RPMI 1640培养液3 ml，后两组加入相应的无血清无抗生素RPMI 1640培养液稀释的病毒液3 ml转染[在前期试验中已经测得Ad的感染复数(MOI)值在20的时候达到最佳的感染效果，本实验MOI值与前期实验相同]。8 h后换含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液继续培养36 h，对转染前后的细胞行部分生物学特性研究。 　　1.2.3 Millicell小室细胞体外迁移实验 分别收集对照组、AdGFP组和AdV