湖北茶树品种分子鉴定和亲缘关系的ISSR分析.pdfVIP

茶科技与产业发展论坛论文集 湖北茶树品种分子鉴定和亲缘关系的lSSR分析 陈勋，金孝芳，闵彩云，贾尚智 (湖北省农业科技创新中心果茶分中心，湖北省农业科学院果树茶叶研究所， 湖北省茶叶工程技术研究中心，湖北武汉430209) 茶树品种资源遗传亲缘关系及分类的研究将为探讨茶树的起源以及茶树资源的利 用提供科学的依据。对于茶树品种资源的研究，从形态学、生物化学、细胞学等方面开 展了大量的工作，取得了一定的成绩，但均受环境因子以及茶树的年龄、发育阶段等因 素的影响。茶树是自交不育高度异质性作物，许多性状如形态学、生物化学和生理学指 标因受环境的影响而呈现出连续性变异或高度的可塑性。大多数形态学指标甚至受个体 发育阶段的影响，这就给茶树种质性状的正确描述，以及种质鉴定的确定带来困难，也 在一定程度上限制了茶树种质资源的收集、保存和利用，种子繁育后代存在大量变异， 也给遗传后代的鉴定带来了许多困难。遗传标记是识别基因型差异的有效方法，通过对 杂交后代的分子标记分析，可以了解这些标记以及它们紧密连锁的相关基因所控制的遗 传性。分子标记技术以其快速、高效、稳定的特点在茶树种质资源鉴定、遗传多样性及 系统发育研究、育种材料早期选择等方面显示出重要作用n·钔。目前．运用于茶树种质 ISSR在茶树上应用较少，起步比较晚，是一种简单序列重复区间扩增多态性分子标记。 ISSR是1990年代发展起来的新型标记技术，具有多态性高，重复性好，开发成本低， 操作简单等优点，已成功应用在水稻阳1、小麦阻1、马铃薯n01、柑橘n¨等作物品种的鉴别 研究上，显示了巨大的应用潜力。 湖北省茶叶生产历史悠久，自然条件优越，茶树种质资源十分丰富。本研究应用 ISSR标记对湖北的茶树品种进行分子标记鉴定研究，寻求茶树资源特异性ISSR分子标 记和应用其进行茶树资源鉴定的可行性，为茶树种质资源的评价鉴定提供一种方便有效 的技术手段。 1．材料和方法 1．1 试材 鄂茶l号至鄂茶12号(表1)共12个品种均采自湖北省农科院果树茶叶研究所茶 茶科技与产业发展论坛论文集 树种植资源圃，取其新梢，冰块冷冻保存后置于-80C冰箱保存。 1．2 方法 1．2．1 DNA提取 参照陈亮等n23方法，采用改进的SDS法微量提取基因组DNA。0．8％琼脂糖凝胶电泳 检测DNA质量，用紫外分光光度计ND-1000(USA)测定DNA浓度。 1．2．2ISSR—PCR扩增和产物检测 选出扩增条带清晰、反应稳定的11个引物对所有供试品种的DNA样品进行扩增。扩增 1N， 扩增程序为94℃预交性5分钟；94。C变性1分钟，退火30秒(各引物的退火温度 型PCR仪(MJ GelDoc 等n钔的方法银染显色。Bio-Rad 示。 1．2．3数据处理和分析 利用Quantityone软件结合人工方法读带，将电泳图上清晰且可重复出现的条带 记为“1，同一位置无带和不易分辨的弱带记为“0一，建立原始距阵。计算每个引物的 多态性百分率(多态性谱带数／总谱带数X100％)。利用NTSYSpc and Multivariate Taxonomy Analysis Pair MethodArithmetic 相似系数矩阵，按类平均方法UPGMA(UnweightedGroup with Mean)对供试品种进行聚类分析，绘制遗传关系树状图。 2．结果与分析 2．1 基因组DNA 之间，平均在1．8左右，能够很好的满足PCR所需要的条件。 茶科技与产业发展论坛论文集 2．2 ISSR产物的多态性 对30个ISSR引物进行筛选，选择了扩增结果理想，多态性好的11个引物对供试 品种进行分析，引物编号和序列见表2。这11个引物在12份供试品种中共扩增出186 条带，其中165条呈现多态性，