补阳还五汤对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CA4区Hes-1和Hes-5表达影响.pdfVIP

补阳还五汤对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CA4区 Hes一1和Hes一5表达的影响 涂建锋魏良浩周晟昂 张可 陈环 张美齐蔡文伟杨悦 【摘要】目的探讨补阳还五汤对脑缺血再灌注大鼠不同时期海马CA4区Hesl和 Hess表达的影响，阐明补阳还五汤对神经干细胞增殖分化的作用及可能分子机制。方 法清洁级sD大鼠63只随机分为补阳还五汤组(GroupBYHWT)、脑缺血再灌注损伤 模型组(Group Sham)。采用大脑中动脉阻塞线拴法(MCAO CIRI)、假手术组(Group 法)建立BYHWT组和CIRI组的局灶性脑缺血再灌注大鼠模型。脑缺血2小时，分别 再灌注10天、19天和28天，采用免疫组化sP法检测海马CA4区Hesl和Hess表达的 阳性细胞数目，并进行单因素方差分析(one wayANOVA)，两组问均数差异性比较采用 t检验。结果术后10天和19天，CIRI组大鼠海马CA4区的Hesl和Hes5阳性细胞密 较CIRI组及Sham组都大(p0．01)；而在术后28天，则显著低于CIRI组与Sham组 (p0．01)。CIRI组和BYHWT组术后19天大鼠海马CA4区阳性细胞密度分别较术 后10天增加(P0．01)；而术后28天阳性细胞密度较术后19天降低(P0．01)。结论 补阳还五汤在脑缺血再灌注损伤早中期通过上调大鼠海马CA4区Hesl和Hes5的表 达，而在晚期通过下调其表达，而对局灶性脑缺血再灌注损伤产生神经修复作用，该作 用的发挥可能是通过控制Hesl和Hes5的表达水平来调控Notch信号传导系统，进而 调节NSCs的增殖与分化。 【关键词】补阳还五汤，缺血再灌注，海马，Hes一1，Hes-5 补阳还五汤是临床上治疗缺血性脑卒中的常用 内源性NSCs增殖分化的影响及其作用机制，挖掘 方剂之一，具有补气活血化瘀之功效，临床用于治疗 传统中药方剂的重要科学价值。 缺血性脑血管病及其后遗症取得了较好的疗效，并 1 材料与方法 初步证实其具有抗神经细胞凋亡作用，但其具体保 护机制尚未明确，该经典方剂是否通过调控Hesl和1．1 材料 Hes5的表达从而介导Notch信号传导，在NSCs增1．1．1实验动物清洁级健康成年雄性SD大鼠63 殖分化中发挥重要作用从而产生神经保护作用目前 只，体质量(250±20)g，由浙江中医药大学实验动 尚未明确。本实验采用大脑中动脉阻塞线栓法建立 物中-1、5提供。饲养环境室温控制在15—25℃，保持 局灶性脑缺血再灌注大鼠模型，动态观察补阳还五 空气流通，自然光线照明，自由摄水饮食。 汤在不同时间对脑缺血再灌注模型大鼠海马CA4 1．1．2实验药物中药补阳还五汤：黄芪1209、赤芍 区Notch信号转导通路的重要效应分子Hes一1、Hes． 5蛋白表达的影响，探讨其对脑缺血再灌注损伤后 仁109，共七味药物，药材购于浙江中医药大学第一 门诊部，用自动煎药壶一剂煎两次混合后再人锅中 基金项目：浙江省中医药科学研究基金计划资助项目 浓缩至含生药39／ml，放人无菌容器中置于4℃冰箱 (2010ZA003)；浙江省科技厅公益性技术应用研究计划实验动物平 保存备用。 台项目(2013C37022) 作者单位：310014杭州，浙江省人民医院急诊科(涂建锋，魏良 浩，周晟昂，张可，陈环，张美齐，蔡文伟)；浙江医学高等专科学校 试剂盒、DAB显色试剂盒(北京博奥森生物技术有 (杨悦) 限公司)和PBS缓冲液(武汉博仕德生物工程有限为灌注成功，开颅取脑，入相同固定液(4℃)中固定 公司)。 1周，脱水、透明、浸蜡，连续制作脑部冠状切片。 1．1．4主要仪器Olympus显微镜(El本Olympus公 司)；303-5型数显电热培养箱(上海泸南科学仪器化sP方法对含有海马区石蜡切片进行Hesl和 联营厂)；DHG-9140型鼓风干燥箱(海益恒实验仪 器有限公司)；Leitzl52型石蜡切片机(德国Leitz公1：50，阴性对照组采用PBS溶液替代I