测定基因表达的新方法TaqMan+PCR.pdfVIP

of Hou D，etalAbeakedbirdfromtheJtLassicChioaNmuM，1995，377：616—618 Lianhan，丑10n#eZlacn，L丑Ⅱy M．DodsonPGrowthinMesozoicbirds№mn，1994，368：196～197 A．Chiap”L tings Chinsamy AdeEvolutionof evidenceEvolTheory，1974，I：51～80 Rieqles endothemq：histological T and evidence0f indinosaursNature，1972，238：81—85 BakkerR Anatomicalecologlcal endothermy ofBirdsIn：Heeht，etal，The ofbirdsEichstatt，1985，199～207 BockWJ TheArborealTheoryfortheOrigin beginnings PCR 测定基因表达的新方法TaqMan 王涛MorrisJ．Brown MedicineAddenbrooke’s (ClinicalPharmacologyUnit，Dept．of Hospital，CambridgeUniversity，uK) 7700 PRISM PCR。该方 摘要本文介绍了一种用ABI seqLlenceDetector进行基因表达定量的新方法—I知MBJl 8唧㈣ce Detector 们测定了人类心肌腺苷酸环化酶的mRNA水平，发现岛一肾上腺素受体阻滞剂并不影响腺苷酸环化酶第Ⅵ型的表 达，提示该酶不参与人类心肌B_受体问交叉调节的机制。 关键词TaqManPCR腺苷酸环化酶 量表达基因的定量。其缺点是，在RNA酶消化后，所得的杂交片断需要纯化，相继电泳分析及放射自显影， 此外cRNA探针的制备需要重组载体及RNA的体外转录，比较费时费力。 7700 开，使Reporter荧光游离于Quencher荧光。ABISequence Man PER。 PCR在同一个管中一次完成，也可以分别合成后再进行TaqMan 本文利用TaqMan 介导的信息传递系统的一个关键酶，是G_蛋白(Gs)的效应器，催化产生细胞内的第二信使——-cAMP。 1方法 1．1 RNA提取 人类右心耳组织来源于进行冠状动脉搭桥手术及瓣膜手术的心脏病人。总RNA的提取采用硫氰酸胍 ——异丙醇沉淀法。所得的RNA经无RNA酶的DNA酶I处理，分装，贮存于一70℃至使用。 1．2 eDNA合成 48ffl含有总RNA 148 3mmol／L，KCl125rnmol／L，DDT pH8．3，Mgcl2 cC 至4℃。标准cDNA由同样方法用体外合成的标准RNA(见下)合成。 1．3标准RNA的合成 PCR产物克隆于bMosBlue截体中，提纯的质粒被Barn 675bp的ACVI 沉淀后，用Gene Quant进行RNA浓度测定。 1．4 PCR lraqMan ACVI探针及引物运用Primer