实验-酪蛋白的制备.pptVIP

酪蛋白的制备 原理 等电点沉淀（选择性沉淀） 利用蛋白质在等电点时溶解度最低的性质。 注意： 调节溶液到蛋白质等电点时，可以使蛋白质溶解度最低，但是并不意味着蛋白质会沉淀出来。 几种主要沉淀方法比较 实验课学习的重点 1、基本的操作 2、每一步的实验现象 3、每一步操作的目的 40℃水浴预热10分钟（HAC缓冲液同时预 热）用滴管加入HAC缓冲液约2ml（pH 4.8） 离心，3000转/分，15分钟 1、布朗运动加速蛋白分子的碰撞 2、等电点附近蛋白质的溶解度最低 用4ml蒸馏水洗涤离心，3000转/分，15分钟 除去沉淀中的可溶部分 95%乙醇洗涤离心，2500转/分，10分钟 除去沉淀中的脂类物质 乙醚2ml洗涤离心，2500转/分，10分钟 脱水 0.1N NaOH 2ml溶解加水至10ml 酪蛋白是酸性蛋白质，溶解于碱性溶液中，方便下次双缩脲法测定 加分问题 1、 请问用缓冲液、乙醚、乙醇洗涤沉淀的目的是什么？ 2、请问本次实验加液体时使用什么仪器？为什么？ 操作的改动 1、离心时统一变为10,000rpm×5min 2、统一使用5ml的EP管 离心技术 离心技术（centrifugal technique）是根据颗粒在作匀速圆周运动时，受到一个外向的离心力的行为，而发展起来的一种分离技术。这项技术应用很广，诸如分离化学反应后的沉淀物，分离天然的生物大分子、无机物、有机物，收集细胞及细胞器，等等。 当一个粒子（生物大分子或细胞器）在高速旋转下受到离心力作用时，此离心力（F）可由下式表示： F = ma = mω2 r a — 粒子旋转的加速度， m — 沉降粒子的有效质量，ω—粒子旋转的角速度， r—粒子的旋转半径( cm )。 相对离心力是指在离心场中，作用于颗粒的离心力相当于地球重力的倍数，单位是重力加速度（g）（980cm/sec2）。相对离心力也可用数字乘以g来表示，例如25000×g，表示相对离心力为25000。 一般低速离心时常以转速“rpm”表示，高速离心时常以“g”表示。 离心机的类型 1．普通离心机　最大转速6000 rpm左右，最大相对离心力近6000×g ２．高速冷冻离心机　最大转速为20000～25000rpm，最大相对离心力为89000×g ３．超速离心机　转速可达50000～80000 rpm，最大相对离心力可达510000×g。 * * 牛乳2ml 40℃水浴预热10分钟（HAC缓冲液同时预热）用滴管加入HAC缓冲液约2ml（pH4.8）离心，3000转/分，15分钟 清液 沉淀 清液 沉淀 清液 沉淀 清液 沉淀 用4ml蒸馏水洗涤离心，3000转/分，15分钟 95%乙醇洗涤离心，2500转/分，10分钟 乙醚2ml洗涤离心，2500转/分，10分钟 0.1NNaOH2ml加水至10ml 待测