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第23卷 第 1期 仲恺农业工程学院学报 Vo1.23,No.1
2010年3月 JournalofZhongkaiUniversityofAgricultureandEnsineefing March,2010
新生仔猪小肠上皮细胞体外培养的研究
李 莉,高淑静,张守全,陈俊伟,陆咸赏,罗 园,江青艳
(华南农业大学动物科学学院,广东广州 510642)
摘要:采用灌肠消化、组织块消化、机械刮取+胰蛋白酶消化和机械刮取+胶原酶消化等4种方法对仔猪小肠
黏膜上皮细胞 (Intestinalepithelialcell,IEC)的体外分离培养进行了比较.结果表明,使用机械刮取+胶原酶消
化法分离IEC,可简便快速地获得数量大、活性高的小肠上皮细胞,其中原代培养细胞24h出现贴壁,7~8d
明显增殖,1O一12d贴壁细胞汇合成片,18—21d细胞呈 “铺路石”状;传代培养细胞3h出现贴壁,3~4d
快速增殖.采用碱性磷酸酶显色反应检测,90%以上的贴壁细胞呈阳性反应.
关键词:猪;小肠;上皮细胞;原代培养;传代培养
中图分类号:Q2-33;$811.4 文献标识码:A 文章编号:1674—5663(2010)01—0030—04
Studiesonisolationandprimarycultureofneonatepigletintestinalepithelialcell
LIli,GAOShu-jing,ZHANGShou—quan,CHENJun—wei,LUXian—shang,LUOYuan,JIANGQing—yah
(CollegeofAnimalSciences,SouthChinaAgriculturalUniversity,Guangzhou510642,China)
Abstract:Inordertoobtainpure,viable,andfunctionalintestinalepithelialceils(IEC)frompiglets,
fourdissociationmethodsincludingcoloclysisdigestion,organizationblockdigestion,mechanicalscrape
plustrypsin digestionand nad mechanical scrapepluscollagenase digestion were tested.Theresults
showedhtatmechanical scrapepluscoliagenasedigestionwasthebestmehtodtoisolateIEC.About24
hoursafterinoculation,IECatatchedtohtesurfaceofhteconatiner.Thecellsproliferatedobviouslyat7
— 8daysofculture.reached80% ofconfluenceat10~12daysandshowed “pavement”typical charac—
terat18—21days.About3hoursaftersplitfrom theprimarilyculturedcells,IECbegantoattached,
andremarkablyproliferatedat3~4days.Histochemicalstainingforalkalinephosphatase(AKP)re—
vealedthatAKPactivitywaspositiveinmorehtan90% ofhteattachedcelis.
Keywords:pig;smallintestine;epihtelialcell;primary culture;passageculture
小肠是食物进行消化吸收的主要场所,而小肠 培养方法,希望能够为相关研究与应用提供参考.
黏膜上皮细胞是肠道主要的功能细胞,参与肠道食
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