海参多糖的纯化及理化分析研究进展.pdfVIP

卉哥．渔业 2011年第 28卷第 3期 SharldOrlgFisheries 2011，28 3 益参蜜@_—一 海 参 专 用 系 列 饵 料 海 洋 红 酵 母 EM菌 海参多糖的纯化 浓 缩 单 胞 藻 电话 ： 0411 座机电话号码 1座机电话号码19 及理化分析研究进展 林威威 张 健 王茂剑 陈 涛 高继庆 赵云平 海参是一种珍贵的海产品，自古以来便有 “陆有 较普遍采用 的脱色方法。韩惠敏 等人对双氧水氧化 人参，海有海参”之说。海参的营养价值很高，不仅含 脱色与活性炭吸附脱色的结果进行了比较 ，结果显示 有蛋白质、脂类和糖类，还含有钙 、磷 、铁 、钾、碘等 双氧水的氧化脱色较活性炭吸附脱色多糖平均得率高 营养素。海参的特殊营养和保健作用，主要缘于其体内 8．92％。但双氧水氧化性强，在脱除色素的同时也会在 的海参多糖、海参皂苷以及其它一些暂未被发现的活性 一 定程度上引起活性成分的氧化，造成损失。 物质。目前研究显示 ，海参多糖具有抗凝血、抗肿瘤 、 另有研究表明 ，使用大孔吸附树脂柱脱色对海参 免疫调节 、延缓衰老等多种生物活性。同时，海参多糖 提取物造成的损失较少，且可以减少对阴离子交换柱填 在组织中的含量高、硫酸化程度大，在动物类食品中极 料的损伤 ，有利于进一步的分离纯化。 为罕见，为其它补品如鱼翅、鹿茸所不及。 2．2去蛋 白方法 海参多糖的提取工艺 日益成熟，但所得粗多糖提 海参多糖提取液 中蛋 白质的除去通常采用3种方 取物中一般含有多种杂质 ，为了满足研究需要，有必要 法 ： 对其进行进一步分离纯化。 2．2．1Sevag~1 利用蛋白质在氯仿等有机溶剂中变 1分离纯化步骤 性的特点，将提取液与Sevag]~ ]1[氯仿：正丁醇 5：1 v，v 】 常见的粗多糖分离纯化步骤如下所示 ： 按5：1混合 ，振荡后离 fi,，变性后的蛋白质介于提取液与 脱色、去蛋白 分离纯化 Seva斌 剂交界处。 粗多糖 精制多糖 纯化多糖 2．2_2三氯乙酸法 TCA 在低温条件下向提取液中 其中的关键步骤主要包括脱色、去蛋 白及分离纯 加入适量的三氯乙酸 浓度15％～30％，m／v ，混匀后 化。 低温静置 ，离心除去沉淀即得无蛋白质的多糖提取液。 2脱色 去蛋白 2．2．3盐析法 向提取液中加入某些浓度的无机盐 如 多糖粗提取物中的杂质较多，主要为蛋 白质 、色 硫酸铵或硫酸钠 后 ，可以使蛋白质凝聚从提取液中析 素及一些极性较大的小分子物质 ，纯化的首要步骤即除 出。这时向提取液中加硫酸铵至饱和，离心除去沉淀即 去此类物质。 可 。 2．1脱 色方法 3种方法各有利弊：Sevag法条件温和，不会引起多 海参粗多糖中含有的酚化型化合物具有较深 的色 糖的变性，但复杂 、费时、效率低且样品损失较大，反 泽，在纯化分离前需要进行脱色处理。 目前常用的方法 复多次才能将蛋白质除尽；三氯醋酸酸性较强，往往会 主要包括双氧水氧化脱色、活性炭吸附脱色”及大孔吸 引起某些多糖的降解 ，所以操作必须在低温下进行，不 附树脂吸附脱色。 过该法效率较高；盐析法的条件比较温和，损失较小， 双氧水氧化脱色法和活性炭吸附脱色法是 目前比 操作简单。 收稿 日期：201l-01-05 2．2．4综合法 张红静 等比较-．fSevag法、三氯乙酸法 ·40 · 卉哥渔业 2011年第28卷第3期 ShandongFisheries 2011，28 3 TCA 及木瓜蛋白酶结合Sevag法除蛋Fj的效果，从蛋 此法在常温 、无相变的条件下实现分离，分离效率与膜 白残留量和多糖的得率两方面进行评价，认为粗多糖在 的类型和质量有关。李燕妮p探索了超滤法分离纯化刺 通过木瓜蛋白酶处理后 ，大部分游离蛋白质 、多肽及部 参酸性粘多糖 的工艺，制得的多糖纯度为93．4％、收率 分与多糖结合的蛋白质被降解 ，再通过Sevag法加 以分 为0．32％ 以鲜刺参质量计 ，多糖截 留率达~1]97．2％。 离，能有效地脱除粗多糖中的蛋 白，是一种较理想的方 这些都为海参多糖的进一步纯化提供了有益的探索。 法 。 3．3 色谱法 2．5 除无机盐 利用各种物质在 固定相和流动相之间有不 同的平 粗多糖中无机盐的除去一般采用80％乙醇、无水乙 衡分配系数或吸附系数来进行分离纯化的，常规的色谱 醇和丙酮洗涤2～3次除去，经烘箱干燥或冷冻干燥可得 法可分为薄层色谱法、纸色谱法、柱色谱法和于柱色谱 到海参精制多糖。 法等四大类 ，通常所用的有薄层色谱法和柱色谱法。 3多糖分离纯化主要方法 薄层色谱法在分离纯化 中可 以探索柱色谱的分离 海参多糖经去色素、去蛋白等杂质后得到