猪伪狂犬病病毒GZ-Z1株gE基因的克隆和原核表达质粒的构建.pdfVIP

366蟋》2011年学术年会 T030002 猪伪狂犬病病毒GZ-ZI株gE基因的克隆与原核表达质粒的构建 曾智勇1·2周 莉1 汤德元1 刘志杰1 梁海英3 李谦1 肖超能1王彬1王凤1甘振磊1 (1．贵州大学动物科学学院，贵州贵阳550025；2．贵州省动物疫病研究室，贵州贵阳550025； 3．贵州大学教学实验场，贵州贵阳550025) 引言 猪伪狂犬病病毒(PRv)为双股线性DNA病毒，现已被广泛用作研究疱疹病毒侵袭机制和形态发生 毒力大大降低。目前我国猪场主要通过接种gE基因缺失疫苗来进行免疫，且用血清学检测可区分出疫 GZ—Z1 苗免疫动物和野毒株感染动物，从而有效防止PRV的进一步扩散。本研究通过PCR技术扩增PRV 分离株的gE全基因，并构建原核表达质粒，为其进一步研究奠定基础。 材料和方法 PRV GZ．Z1毒株，pET-32a(+)载体，BL21(DE3)菌株。针对PRVgE基因序列设计一对特异性 引物P1和P2，以提取的PRV 体后，再哑克隆至pET32a(+)原核表达载体中，经系列鉴定后送公司测序，绘制PRV系统进化发生树。 结果 GZ．Z1 gE 测序结果表明成功构建了重组克隆质粒pMDl8一gE和重组原核表达质粒pET32a—gE。PRV 94．8％～98．6％，最高为75V19株，最低为广少HFa株。 讨论 本研究成功构建了PRV GZ．Z1分离株gE全基因的原核表达质粒，该分离株与国内外毒株的gE基因 具有严格的保守性，且在第125位和第126位氨基酸并没有发生异常改变，表明该分离株的毒力没有较大 的变异。PRVGZ—Z1 gE蛋白具有4个N一联糖基化位点，比其它分离株少一个糖基化位点，这种差异是否 会引起gE蛋白的免疫性发生改变还有待进一步的研究。 参考文献 3842． 606-608． 【3】白丽丽，王旭荣，刘建营，等．伪狂犬病毒GDSH株的分离鉴定及gE基冈的序列分析【J】．中国动物检疫，2008，25(1)： 23．26． diseasevaccination from 【4】Pensaert GFavoreelH，et anddifferentiationofvaccinatedinfected M，Labarque a1．Aujeszky’S 19：243-254． pigs们．DevBiol(Basel)，2004，1 C isothermal for detectiondifferentiationof [61 FCuiSJ，Zhu and Zhang C．Loop-mediatedamplificationrapid wild-type and virus pseudorabies vaccines[J】．VtrolMethods，2010，169(I)：239．243． gene．deleted