荧光定量PCR定量检测崂山奶山羊鲜奶中弓形虫的DNA.pdfVIP

『首届中国奶山羊产业高层论坛论文集』 圜 C 荧光定量PR定量检测崂山 奶山羊鲜奶中弓形虫的DNA 曲光刚1，2，沈志强1，2，金婷婷2，白耀国2， 唐世云1，张娜2，李书光1，2，高三阳1，程明5 (1．山东省滨州畜牧兽医研究院，滨州，山东25660 o．2．山东绿都生物科技有限公司， 滨州，山东2566005．青岛市畜牧兽医研究所，青岛，山东266200) 摘要：本研究利用荧光定量PcR方法对崂山奶 对羊弓形虫病给与了特别关注，国内外地区牛和羊弓 山羊鲜奶中的弓形虫进行定量检测。首先应用间接血 形虫病的感染率大不相同，国内外的一些调查结果显 凝方法(IHA)对95份羊血清进行弓形虫IgG抗体检测， 示：羊弓形虫的感染率在21．1％～61．6％。目前国 分析羊群弓形虫病的感染情况；然后利用荧光定量 外有研究发现在部分血清学检测为阳性的哺乳动物 PcR对血清阳性崂山奶山羊鲜奶中的弓形虫进行定量 的奶样中检测到了弓形虫特异性DNA，这一发现表明 检测。结果95份羊血清中有6份为弓形虫IgG抗体弓形虫可能进入奶中，并污染的奶的传播继续遣成危 阳性，阳性率为6．3％。荧光定量PcR弓形虫DNA检 害。为研究我国奶山羊感染弓形虫后，其奶样中是否 测结果证明6份血清阳性对应的羊鲜奶中均检测到较 存在弓形虫及其含量，本试验首先通过间接血凝(IHA) 高浓度的弓形虫DNA，弓形虫血清阳性奶山羊鲜奶检 方法检测送检的羊血清中lgG抗体水平，然后采用荧 测阳性率100％，羊群鲜奶阳性率6．5％。本研究为快 光定量PcR方法检测血清阳性羊奶奶样，从而本研究 速定量检测山羊鲜奶中弓形虫提供了方法，为分析我 为快速定量检测山羊鲜奶中弓形虫提供了方法，为分 国奶山羊感染弓形虫后鲜奶中可能的虫体含量及弓形 析我国奶山羊感染弓形虫后鲜奶中可能的虫体含量 虫通过羊奶感染人的传播途径提供科学依据，具有重 及弓形虫通过羊奶感染人的传播途径提供科学依据， 要的理论意义与实际应用价值。 具有重要的理论意义与实际应用价值。 关键词：弓形虫；血清；羊奶；荧光定量PcR检 1材料 测，IHA弓形虫(ToxopIasmagondii)是一种世界性分布 1．1病料来源 的寄生在多种温血动物和人的多种有核细胞内的机会 送检崂山奶山羊血清样品及对应的鲜奶样品各 性致病原虫，可通过先天性和获得性两种途径感染。 95份。 患弓形虫病的畜禽和带虫者的肉、内脏、血液、渗出 1．2主要试剂 SYBRPrem呔EX 液和排泄物是主要的传染源。弓形虫传染的途径主要 TaqII购白宝生物工程(大 是摄取被动物的体液或粪便污染过的食物，或食用未 连)公司，基因组DNA提取试剂盒购自北京百泰克 煮熟的含有弓形虫包囊的肉类、蛋类、奶类而导致感 生物技术有限公司，弓形虫间接血凝(IHA)试剂盒 染。随着各地羊弓形虫病例不断发现，相关部门已经 由中国农科院兰州兽医研究所提供。 基金项目：山东省现代农业产业技术体系羊创新团队项目(SDAIT一09—01l一07) 作者简介：曲光刚，山东荣成人，博士，助理研究员 }通讯作者：沈志强，博士，研究员二级，Emil：bzShenzq@163．com 圜 『首届中国奶山羊产业高层论坛论文集』 1．3主要仪器