CpG+ODN核心序列改变对其生物学活性的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJou靶l0 !巳Y ： ! 2；Q 二三Q垫 · 2025 · [文章编号] 1000—4718{2008)10—2025—04 CpGODN核心序列改变对其生物学活性的影响 丁国富， 李 斌， 吴 种， 罗 平， 李 军， 周 红 (第三军医大学药学院药理学教研室，重庆400038) [摘 要] 目的：观察含 CpG基序寡核苷酸 (CpGODN)核心序列改变后对其细胞 内化和免疫活性的影响。 方法：人工合成6一FAM标记的CpGODN，将其核心序列CpG二核苷酸的胞嘧啶(C)甲基化 (CpGODN)、胞嘧啶 (C)和鸟嘌呤(G)顺序颠倒 (GpCODN)，在RAW264．7细胞培养体系中加入不同的ODN后，应用流式细胞术和激 光共聚焦显微镜观察ODN的细胞 内化与定位，ELISA法检测 ODN对细胞释放 TNF— 的影响。结果：CpGODN核 心序列的改变不影响其在细胞内的聚集，激光共聚焦术检测发现6一FAM ODN被内化进入RAW264．7细胞，绿色 荧光小体呈散点状分布于细胞中；胞嘧啶甲基化后，CpGODN促细胞释放 TNF一0【的作用显著降低 (P0．01)， 仅保留部分刺激活性，但是GpCODN几乎丧失了促细胞释放TNF—ot的作用。结论：CG序列对CpGODN的生物 活性至关重要，胞嘧啶c甲基化不影响CpGODN在细胞内的定位，但能部分抑制CpGODN的免疫活性。 [关键词] CpG寡核苷酸；甲基化；受体，Toll样 [中图分类号] R363 [文献标识码] A Alteration oftheCpG ODN coresequenceinfluencesitsbiologicalfunc- tions DINGGuo—fu，LIBin，WUChong，LUOPing，LIJun，ZHOUHong (DepartmentofPharmacology，Schoolof Pharmacy，ThirdMilitaryMedicalUniversity，Chongqing400038，China． E—mail：zhouh64@mail．tmmu．con．en) [ABSTRACT] AIM ：ToinvestigatewhetheralterationofthecoresequenceofCpGODNchangeitscellularintera— nalizationandimmunological activity．METHODS：6一FAM labeledCpG ODNwasartificialsynthesizedandtheCpG di— nucleotidewasalteredbycytosinemethylation(CpGODN)and／orCGsequencereversal(GpCODN)．RAW264．7ceils wereculturedinvitro．Afterstimulatedwithdifferent6一FAM labeledODN．theaccumulationofODN inthecellswere measuredbyflow eytometry．RAW264．7cellsgrownonglasseoverslipswerepretreatedwitheachODN andsubsequently thelocalizationofODNincellswereobservedbyconfocalscanningmicroscopy．Meanwhile，thelevelofTNF—otinsuper— natantwastestedbyELISA．RESULTS：ThealterationofthecoresequenceofCpGODNdidn’tinfluenceitsaccumulation inRAW264．7cells．／nvitro．6一FAM labeledODN was internalizedintoRAW264．7cellsandafew rgeenfluorescent dotswerewidelydistributed