CREG调控IGF2R%2fIGFII内吞抑制人血管平滑肌细胞增殖.pdfVIP

· 1676· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2011，27(9)：1676—1681 [文章编号] 1000—4718(2011)09—1676—06 CREG调控 IGF2R／IGFII 内吞抑制人血管平滑肌细胞增殖 闰承慧 ， 栾 波 ， 黄明方 ， 李 杰 ， 张效林 ， 韩雅玲 (沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科 ，辽宁 沈阳 110840；南京军区福州总医院心内科，福建 福州210002) [摘 要] 目的：探讨 EIA激活基因阻遏子(CREG)抑制人血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的机制。方法：应 用逆转录病毒载体pLNCX2一CREG和pSM2一siCREG分别转染 VSMCs，G418和puromycin筛选得到稳定转染细胞 VSMCs—CREG和 VSMCs—siCREG；Westernblotting检测转染前后细胞 CREG的表达；BrdU和流式细胞术检测 CREG表达及对 VSMCs增殖的影响。Westernblotting和免疫荧光染色检测细胞胰岛素样生长因子Ⅱ受体 (IGF2R) 的表达；ELISA和RT—PCR检测胰岛素样生长因子 Ⅱ(IGFⅡ)的表达；．Alexa488标记重组 IGFII内吞实验观察 CREG表达对 IGFII内吞的影响；重组IGF2R和anti—IGF2R中和抗体阻断实验观察 IGF2R—IGFII内吞作用对细 胞增殖的影响；Westernblotting检测细胞增殖信号分子PI3K／Akt和ERK表达，抑制剂阻断研究分析上述信号分子 表达变化在细胞增殖中的作用。结果：实验分别得到VSMCs—CREG和VSMCs—siCREG的细胞克隆，VSMCs— CREG中CREG表达增加 ，而VSMCs—sicREG中CREG表达减少。VSMCs—CREG细胞增殖较正常对照组明显受 抑，VSMCs—siCREG细胞增殖显著增加。VSMCs—CREG细胞中IGF2R蛋白在细胞膜上的表达及分布均显著增 加，而VSMCs—siCREG细胞中IGF2R在膜上分布明显下降。CREG过表达促进 IGF2R对 IGFII的内吞作用，抑制 了IGFII的分泌。IGFI1分泌增加启动了CREG沉默后 VSMCs的增殖 ，PI3K／Akt和 MAPK／ERK信号协 同参与了 IGFII对VSMCs增殖的调控作用。结论：CREG通过调控IGF2R在细胞膜的分布，加速 IGFII内吞作用，抑制了体 外培养VSMCs的增殖。 [关键词] EIA激活基因阻遏子；血管平滑肌细胞；受体 ，胰岛素样生长因子 [中图分类号] R363 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．09．003 CREG inhibitsproliferationofVSMCsbymodulatinginternalization 0f IGF2R／IGFⅡ YANCheng—hui，LUANBo，HUANGMing—fang，LIJie，ZHANGXiao—lin ，HAN Ya—ling (CardiovascularResearchInstituteand。DepartmentofCardiology，GeneralHospitalofShenyangMilitaryAreaCommand， Shenyang110840，China；Department ofCardiology，GeneralHospitalofFuzhouMilitaryAreaCommand，Fuzhou 210002，hCina．E—mail：hanyal@263．net) [ABSTRACT] AIM：TostudythemolecularmechanismsofcellulrarepressorofE1A—stimulatedgenes(CREG) ontheproliferationofhumanvascularsmoothmuscleceils(VSMCs)invitro．METHODS：ThepLNCX2一CREGplasmid