ING4基因的克隆及其诱导HeLa细胞凋亡的实验研究.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2007，23(I)：12 -l31 · l27 · [文章编号] 1000-4718(2007)01-0127一o5 ING4基因的克隆及其诱导HeLa细胞凋亡的实验研究 王金志， 缪竞诚， 盛伟华， 杨吉成 (苏州大学医学院基础医学系，江苏 苏州215000) 【摘 要] 目的：分离小鼠ING4基因并构建真核表达载体pcDNA3．0一ING4，观察 lNG4基因转染人宫颈癌 HeLa细胞后对细胞凋亡的影响。方法：应用BT—PCB技术从小鼠肝组织中扩增得到 ING4cDNA。利用DNA重组 技术构建真核表达载体pcDNA3．0一ING4并用双酶切、PCR、基因测序进行鉴定，然后利用 阳离子脂质体 lipe- fectamine将其转染HeLa细胞，用BT—PCB检测ING4基因的表达情况，应用荧光显微镜(HoechsO3258染色)、激 光扫描共聚焦显微镜和流式细胞仪观察细胞凋亡情况。结果：BT—PCB产物为约 750bp的条带，构建的真核表 达载体PeDNA3．0一INCA经双酶切、PCB鉴定均出现 750bp大小的条带，基 因测序正确，Hoechst33258染色发现 PeDNA3．0一ING4转染 HeLa细胞 的凋亡率 (21．25％)明显高于对照组 PeDNA3．0转染 HeIJa细胞的凋亡率 (8．9l％，Po．01)。共聚焦显微镜也观察到了典型的细胞凋亡。细胞周期检测显示 S期细胞所 占百分数 peD- NA3．0一ING4转染组高于PeDNA3．0转染组。结论：分离得到了小鼠ING4基 因并成功构建真核表达载体 peD- NA3．0一ING4，初步研究发现该基因转染HeLa细胞后可促使细胞凋亡。 [关键词】 基因，ING4；细胞转染；HeLa细胞 [中圈分类号】 Q786 [文献标识码】 A M olecularcloningofING4 geneand ING4--induced apoptosisinHeLa cells WANGJin—zhi，MIAOJing—cheng，SHENGWei—hua，YANGJi—cheng (DepartmentofMedicine，MedicalCollegeofSurhouUniversity，Suzhou215000，China．E—m ： ， suda．edu．Crt) [ABSTRACT] AIM：ToisolateageneencodingmouseING4，constructPeDNA3．0一ING4recombinanteukaryot- icexpressionpalsmidnadinvestigateitseffectsonHeLacellsn／v／tro．METHODS：ThemouseING4cDNAwas．m#mde byBT—PCBfrom mouseliver．TheeukaryoficexpressionvcetorPeDNA3．0一ING4Wagoortstruc~tedbyDNArecomb ina- tiontcehnique．Th erecomb inantplasmidPeDNA3．0一INC,4wasidentifiedbyPCB，restrictionenzymedigestionnadDNA 9equenceanalysis，thenW88transfected intoHeLacellsbylipefcetamine．Th eepx ressionWas determinedbyBT—PCB． ApopotsisWas detectde byfluorescencemicroscopewiht Hoechst33258 stainingnadlaserscanningconfocal microscope． CellcycledistributionWas measure