siRNA沉默WT1对小鼠足细胞Wnt／β-catenin和nephrin表达的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013，29(2)：219-224 · 219 · [文章编号] 1000—4718(2013)02—0219—06 siRNA沉默 对小鼠足细胞 Wnt／[3-catenin和 nephrin表达的影响 周 静 ， 袁伟杰 ， 谢院生 ， 陈香美 上海交通大学附属第一人民医院肾内科，上海 200080；解放军总医院全军肾脏病研究所，北京 100853) [摘 要] 目的：研究小干扰RNA(siRNA)干扰 基因表达的小鼠足细胞Wnt／31．catenin信号通路的变化 及其对足细胞活力和nephrin表达的影响。方法：采用RPMI一1640培养基在33 条件下传代培养足细胞 ，在37℃ 条件下诱导足细胞分化。应用 册 基因的siRNA转染分化成熟的小鼠足细胞 ，用 MTr法测定细胞活力 ，用实时 qRT．PCR和Westernblotting技术分别检测 mRNA和蛋白的表达。结果：RNA干扰 可诱导小 鼠足细胞 Wntl mRNA和蛋白表达上调，p-31．catenin水平降低及足细胞活力下降，伴有足细胞 nephrinmRNA和蛋白的表达明显下 调。结论：沉默 基因的表达可诱导足细胞活力下降和nephrin表达下调 ，可能与Wnt／31-catenin信号通路的激 活有关。 [关键词] wT1蛋白；足细胞；小干扰RNA；WnV31一catenin信号通路 ；Nephrin [中图分类号] R363 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000-4718．2013．02．006 Effect0f唧 silencingbysiRNA onexpressionofWnt／13-cateninand nephrininmousepodocytes ZHOUJing，YUANWei-jie，XIEYuan—sheng，CHENXiang—mei (DepartmentofNephrology，ShanghaiFirstPeoplesHospital，ShanghaiJiaotongUniversity，Shanghai200080，China； InstituteofNephrology，ChinesePLAGeneralHospital，Be0ng／ 100853，China．E—mail：ywj4169@yahoo．corn．cn) [ABSTRACT] AIM：TostudytheeffectofwTlsilencingbysmallinterferingRNA(siRNA)onpodocytevitality andexpressionofWnt／~一cateninandnephrininmousepodocytes．METHODS：Conditionallyimmortalizedmousepodo- cyteswereculturedat33℃ inRPMI-146 0medium forproliferationandinducedfordifferentiationat37oC．Thepodocytes weretransfectedwithWT1siRNA．ThecellvitalitywasdetectedbyMTYassay．TheexpressionofWTl，Wntl，31-catenin nadnephrinatmRNA na dproteinlevelswasdeterminedbyreal-timeqRT—PeR andWesternblotting．RESULTS：WT／ siRNAinducedtheincreaseintheexpressionofWntlatmRNAandproteinlevels，inhibitedthephosphorylationofB-cate— nin，andreducedthecellvitality．Meanwhile，theexpressionofnephr