Survivin+siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖影响实验研究.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008，24(9)：1699—1703 【文章编号】 1000—4718(2008)09—1699—05 SurvivinsiRNA对人肺腺癌 A549细胞 增殖影响实验研究木 赵岐刚， 司 磊， 田小侠， 李 鹏 (山东省聊城市人民医院检验科 ，山东 聊城 252000) [摘 要] 目的：探讨慢病毒载体介导survivinsiRNA对人肺腺癌A549细胞增殖的影响及其作用机制，为肺 癌基因治疗新策略提供帮助。方法：构建表达 survivin—siRNA的慢病毒载体感染A549细胞株，测定病毒滴度。 采用RT—PCR、免疫组化及Westernblotting等检测感染后不同分组 A549细胞survivin—mRNA和蛋白的变化及 caspase一3蛋 白的变化，通过流式细胞仪及 MTY法检测感染后 A549细胞周期及生长 曲线。结果：RT—PCR及 Westernblotting检测显示 ，转染细胞 (MOI=150)中survivin基因mRNA和蛋白的表达明显降低，抑制率分别为 97％、88％；细胞生长曲线和周期结果显示转染组细胞增殖明显减慢 ，G 期细胞 比例明显增加，s期细胞比例则明 显减少；转染细胞中caspase一3被激活。结论：慢病毒载体介导的siRNA能有效抑制人肺腺癌A549细胞 survivin 基因的表达和细胞增殖，有效激发细胞凋亡 ，有望成为肺腺癌基因治疗的新策略之一。 [关键词] 基因，survivin；肺肿瘤；A549细胞；基因疗法 [中图分类号] R363 [文献标识码] A EffectofsiRNA forsurvivin geneongrowth andapoptosisinA549cells ZHAOQi—gang，SILei，TIANXiao—xia，LIPeng (ThePeoplesHospitalofLiaochengCity，Liaocheng252000。China．E—mail：zqg67680@sina．com．cn) [ABSTRACT] AIM ：ToobservetheinfluenceoflentiviralvectorsexpressingsiRNAforsurvivingeneknockdown inA549ceHs，sequentiallyastoolstoexplorethemoleculepathogenesisandnew genetherapyoflungadenocarcinoma． METHODS：Thelentiviralvectors。whichexpresssurvivinsiRNA，wereconstructedandtransfectedintoA549cellstrain． Thetitersofthelentivirusesweredeterminedby293T cells．Theexpressionsofsurvivinandcaspase一3weredetectedby W estern blottingandRT —PCR．Thecellcycleand cellgrowthofA549 cellswereexaminedbyM1Trand FCM．RE- SULTS：TheexpressionofsurvivinwassuppressedeffectivelybysiRNA targetingsurvivin．TheexpressionofsurvivinmR— NA decreasedby97％ ．Theexpressionofsurvivinproteindecreasedby94％ ．Therateofcellgrowthwasdecreased．Th e G1phasecellswereincreased，whereasSphaseceilsweredecreased．CONCLUSION