变性高效液相色谱技术定量检测急性髓细胞白血病FLT3基因内部串联重复突变方法学的建立.pdfVIP

· 1852· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2011，27(9)：1852—1856 [文章编号] 1000—4718(2011)09—1852—05 变性高效液相色谱技术定量检测急性髓细胞 白血病 FLT3基 因内部 串联重复突变方法学的建立 陈建兰 ，李庆山 ， 王汉平 ，应 逸 ，杜庆华 ，许艳丽 ， 陈晓燕 ，谢健晋 ，毛 平 ， 李志鹏 (广州医学院附属市一人民医院血液科 ，广东 广州 510180；厦门大学生命科学学院分子诊断学实验室，福建 厦门361005) [摘 要] 目的：建立一种应用变性高效液相色谱技术 (DHPLC)相对定量检测急性髓细胞白血病(AML)患 者Fms样酪氨酸激酶 3(FLT3)基因的内部串联重复 (ITD)突变的方法。方法：根据 几乃 一ITD突变基因多位 于 14外显子而设计引物，用聚合酶链反应 (PCR)方法特异性扩增 121例 AML患者FLT3一ITD突变基因，再用DH— PLC技术相对定量检测FLT3一ITD等位基因突变的情况 ；与毛细管电泳法 (CE)检测突变的结果对 比进行该方法 的有效性检验 ；最后与 121例样品PCR扩增产物的测序结果进行对 比。结果：经 DHPLC分析后均能得到特征性 的洗脱峰。121例样本中检测到FLT3一ITD突变阳性的样本 13例，总阳性率为 l0．7％，阳性突变等位基凶的比例 不一，分布范围中位数为34．5％(11．4％一80．2％)，为2l一87bp单个插入片段。阳性率和突变比例与 CE方法检 测结果相比较均无显著差异(P0．05)，并与 121例样本FLT3一ITD扩增PCR产物基因测序结果一致。结论：成 功建立了一种应用DHPLC相对定量检测 AML患者FLT3一ITD基因突变的方法。 [关键词] 变性高效液相色谱 ；白血病，髓样 ，急性；Fnis样酪氨酸激酶 3；内部串联重复；基因 [中图分类号] R733．71 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．09．039 Establishmentofamethod toquantitativelVdetect儿 T3 internaltandem duplication in acutemyeloid leukem ia with denaturing high —-perform- anceliquidchromatography CHENJian—lan，LIQing—shan，WANCHan—ping，YINGYi，DUQing—hua，XU Yan—li，CHENXiao—yan ，XIEJian—jin，MAOPing，LIZhi—peng (DepartmentofHematology，GuangzhouFirstMunicipalPeoplesHospital，TheAffiliatedHospitalofGuangzhouMedical College，Guangzhou510180，China；LaboratoryofMolecularDiagnosis，SchoolofLfieSciences，XiamenUniversity，Xia— Inca361005，China．E—mail：qingshan — f@yahoo．corn) [ABSTRACT] AIM ：Toestablisharelatively—quantitativemethodtodetecttheinternaltandemduplication (ITD)mutationofFms—liketyrosinekinase3(凡乃)geneinacutemyeloidleukemia(AML)patientsusingdenaturing high—performanceliquidchromatography(DHPLC)．METHODS：AccordingtothefactthatmuchmoreFLT3一ITDmu— tationsarelocatedinexon14，wedesignedthep