RNA干扰抑制小鼠脾淋巴细胞分泌IL-1α.pdfVIP

维普资讯 ChineseJournalofPatho · 435 · [文章编号] 1000—4718(2007)O3—0435—03 RNA干扰抑制小 鼠脾淋巴细胞分泌 IL—la木 郑宁宁 ， 于艳秋 ， 宋晓宇 ， 丁旭东 ， 张海鹏 (中国医科大学 基‘础医学院病理生理教研室 ，附属盛京医院麻醉科，辽宁 沈阳 110001) [摘 要] 目的：确定针对 IL—la的siRNA在细胞内与其具有同源互补序列的靶标位点结合后，特异性降 解 IL一1a的mRNA，从而抑制其表达的效果。方法：体外PCR扩增合成针对 IL一1et靶位点的DNA表达盒，纯化 后转染经LPS激活的小鼠脾淋巴细胞，在细胞内源性RNA聚合酶Ⅲ作用下转录形成 siRNA，诱发 目标 mRNA的降 解。于转染后48h收集细胞培养上清。用ELISA法测定 IL—la浓度。结果：干扰组 IL—la分泌量明显低于对 照组和无关干扰组 (P0．05)，抑制率约为 15％。结论：RNA干扰技术可以在原代培养的小 鼠脾淋巴细胞中发挥 特异性干扰作用，产生抑制 lL—la分泌的效果 ，为 IL一1a的基因治疗开拓了新途径。 [关键词] RNA干扰；转录后基因沉默；白细胞介素 1；淋巴细胞 [中圈分类号] R363 [文献标识码] A RNA interferenceinhibitsthesecretionofIL letinm icespleenlympho-· cytes ZHENG Ning—ning ，YU Yan—qiu ，SONG Xiao—yu ，DING Xu— dong ，ZHANG Haj—peng (DepartmentofPathophysiology，CollegeofBasicMedcialSciences，DepartmentofAnesthesia，TheAO~iatedShen~ing Hospital，ChinaMedicalUniversity，Shenyangl10001，China．E—mail：hpzhangsq@yahoo．corn) [ABSTRACT] AIM ：TodecidetheeffectthatselectedsiRNAdegradesmRNAofIL—letspecificallyandsup- pressionofitsexpression afterconnectde withtargetsitewithhomologycomplementarysequence．METHODS：Synthe- sizedDNA expressionboxaimde directlyattargetsitethroughPCRreactioninvivowagpurified，nadtransfectedintolym- phocytessfim~atde byLPS．siRNAwastranscribde bycellulra endogenousRNApolymerasem nadthenevokehtedegra- dationoftargetmRNA．Mter48hoursoftrnasfection．thecellculturesupe matnatWag collectde nadhteconcentrationofIL — lawasas8ayedusingELISA．RESULTS：Compraedwithblank—controlnadnegative— control，selectedsequence dcereasedhteexpressionofIL—la．Rateofthesuppressionwasabout15％ ．CONCLUSION ：RNAitcehnologyproduces specificinterferenceeffectinmousespleenlymphocytesinoriginalculture andinhibitshtee