RNAi沉默Beclin+1基因对维生素K3损伤人肝癌细胞SMMC-7721的影响.pdfVIP

· l288· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathoEhysi~ !堑i!)；! 二!垫! 【文章编号] 1000—4718(2009)07—1288—04 RNAi沉默Beclin1基因对维生素K3 损伤人肝癌细胞 SMMC一7721的影响；I： 杨 闯 ， 张宏宇 ，孔晓霞 ， 王广义 ， 孙连坤 (吉林大学 附属第一医院普外科 ，白求恩医学院病理生理教研室，吉林 长春 130021) [摘 要] 目的：探讨应用RNAi技术沉默Beclin 基因对维生素 (vitaminK，，VitK，)引起的人肝癌SMMC一 7721细胞损伤的影响。方法：应用真核细胞转染技术将 Psilencer3．1一siRNA—Beclin1重组质粒转入人肝癌 SMMC一7721细胞，同时分别设立转染空质粒阴性对照组和转染试剂阴性对照。于48h后收集细胞，分别提取细 胞总RNA及总蛋白，通过RT—PCR和Westernblotting检测Beclin 基因表达。应用40i~mol／LVitK3作用 Beclin 1一siRNA细胞株，Hoechst33342染色检测细胞凋亡率。结果：与对照组相 比，siRNA重组质粒明显降低 BeclinJ mRNA水平，抑制其蛋白表达。40Ixmol／LVitK 作用人肝癌SMMC一7721细胞BeclinJmRNA表达明显高于对照 组，细胞凋亡率增加 (P0．01)；而Beclin1一siRNA细胞株，Beclin，mRNA表达显著低于对照组 ，与4Og~mol／LVit 作用组相 比细胞凋亡率显著增加(P0．01)。结论：Psilencer3．1一siRNA—Beclin1转染人肝癌 SMMC一7721 细胞后，可有效抑制Beclin— mRNA和蛋白的表达，抑制VitK，引起的Beclin1依赖性细胞自噬信号通路的激活， 促进细胞凋亡。 [关键词] RNA干扰；基因，Beclin1；自吞噬作用；细胞凋亡；维生素K3；SMMC一7721细胞 [中图分类号] R730．23 [文献标识码] A EffectofBeclin1RNAinterferenceonVitK injuredSMMC一7721cells YANG Chuang ，ZHANG Hong—yu ，KONG Xiao～xia ，WANG Guang—yi，SUN Lian — kun (DepartmentofGeneralSurgery，TheFimtAffiliatedHospital，JilinUniversity，DepartmentofPathophysiology，Norman BethuneSchoolofMedicalSciences，JliinUniversity，Changchun130021，China．E—mail：sunlk@flu．edu．ca) [ABSTRACT] AIM：ToobservetheeffectofBeclin silencingbyRNAinterference(RNAi)techniquetothein— juryofSMMC一7721hepatomacellsbyvitaminK3(VitK3)．METHODS：TherecombinantplasmidPsilencer3．1一sir— NA —Beclin1wastransfeetedintoSMMC一7721hepatomacellsbyeukaryotiecelltransfectiontechnique．Plasmidvector andcellculturemedium wereusedasnegativeandcontrol，respectively．Thecellswerecollected48hlatertoextractcell RNA andtotalproteinandtodetectBeclinJgeneexpressionbyRT—PCR andW estern blotting．40 ixmol／LVitK3was usedtot