RNAi沉默PSMA基因对前列腺癌LNCaP细胞生物学行为的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiolo 三 ：丝( 2；ZZ ! · l877 · [文章编号] 1000—4718(2008)10—1877—05 RNAi沉默 PSMA基因对前列腺癌 LNCaP 细胞生物学行为的影响 曹开源 ， 张 甜 ， 徐 霖 ， 袁广卿 ， 田小东 ， 黄小荣 ， 丘少鹏 (中山大学 ’中山医学院临床检验标准化研究中心，中山医学院免疫教研室 ， 中LJ【医学院实验教学中心，附属第一医院泌尿外科，广东广州 510080) [摘 要] 目的：构建 LNCaP细胞PSMA基因的shRNA真核表达载体，探讨其对LNCaP细胞中PSMA基因 表达的干扰作用。方法：针对 PSMAmRNA序列设计合成 3对编码 shRNA的寡核苷酸链 ，退火形成双链，连接入 含有BamHI和Hindm酶切位点的pSilencer2．1一U6一neo真核表达载体，双酶切及测序鉴定。使用脂质体转染的 方法将重组质粒导入 LNCaP细胞，G418筛选后RT—PCR、Western blotting检测其对 PSMA基因干扰作用，并观察 对INCaP细胞生物学行为的影响。结果：经酶切及测序鉴定 ，成功构建 shRNA真核表达载体P—shRNA1，2，3转染 LNCaP后，对细胞PSMAmRNA表达抑制率分别为33．15％、9．26％、41．97％，Westernblotting结果显示对PSMA蛋 白表达的抑制率分别为26．26％、6．47％、40．69％。选择抑制效率较高的P—shRNA3进行体外生长及侵袭力实验， 发现干扰后对 LNCaP细胞侵袭力增强，但是对细胞生长影响不大。结论：成功构建了人 PSMA基因的RNAi的真 核表达载体，并在 LNCaP细胞中有效地发挥了对 PSMA基因表达的干扰作用，初步发现PSMA在前列腺癌的侵袭 中起负向调节作用，为进一步研究PSMA的生物学功能，探索前列腺癌的发病机制奠定一定的实验基础。 [关键词] 前列腺肿瘤；前列腺癌特异膜抗原；RNA干扰 [中图分类号] R737．25 [文献标识码] A SilencingofPSMA by RNAiinfluencesbiologicalbehavior ofprostate cancercelllineLNCaP CAO Kai—yuan ，ZHANG Tian ，XU Lin ，YUAN Guang—qing ，TIAN Xiao—dong ， HUANGXiao—rong．QIUShao—peng (R‘esearchCenterforClinicalLaborator)Standard，DepartmentofImmunology，SchoolofPreclinicalMedicine，Basic MedicalExperimentalTeachingCenter，ZhongshanMedicalCollege，Departmentof UrinarySurgery，TheFirstAffiliated Hospital，SunYat—senUniversity，Guangzhou510080，China．E—mail：urology@却 ．163．corn) [ABSTRACT] AIM ：TostudytheblockingeffectofshRNAontheexpressionofPSMAgeneinLNCaPcellline byusingshRNA eukaryoticexpressionvector．METHODS：ThreepairsofDNA templatescodingshRNA，synthesized againstPSMA andclonedintothevectorpSilencer2．1一U6一neo，whichwasnamedpSileneer2．1一U6一neo—shRNA， wereidentifiedbyrestrictionendonucleasedigestionanalysisandDNA sequencing．L