大黄素和小檗碱改善HepG2细胞胰岛素抵抗的机制研究.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 20螋 ( )；丝二型 鱼 Q [文章编号] 1000-4718(2009J10—2044—04 · 短篇论著 · 大黄素和小檗碱改善 HepG2 细胞胰岛素抵抗的机制研究 王慧莲， 王 琦 ， 尹春梅 (山西医科大学第二临床医学院消化内科，山西 太原030001) [摘 要】 目的：探讨大黄素和小檗碱对高浓度游离脂肪酸(FFA)诱导HepG2细胞的胰岛素抵抗 (IR)的影 响及机制。方法：用高浓度的FFA培养 HepG2细胞，诱导为IR的细胞模型，测定培养液中葡萄糖浓度及细胞内糖 原含量作为模型鉴定指标；MTY法分别检测大黄素和小檗碱的最适药物浓度 ；RT—PCR方法检测细胞中脂联素受 体2(AdipoR2)、过氧化物酶体增殖物激活受体 (PPAR~)、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)的mRNA表达。结 果：(1)IR的模型组培养液中葡萄糖含量明显高于正常对照组 ，细胞内糖原含量显著减少，AdipoR2和PPA脚 mRNA表达下降，PEPCKmRNA表达升高(P0．01)。(2)培养液中分别加入大黄素、小檗碱和吡格列酮可明显改 善 IR。结论：高浓度的FFA培养 HepG2细胞，能够诱导 IR，大黄素、小檗碱能显著改善 FFA引起的IR，并且可能 通过AdipoR2、PPAR~、PEPCK而起作用。 [关键词] 胰岛素抵抗 ；大黄素；小檗碱；受体，脂联素 [KEYWORDS] Insulinresistance；Emodin；Berberine；Receptors，adiponectin [中图分类号] R575．5 [文献标识码] A 胰岛素抵抗 (insulinresistance，IR)是非酒精性脂肪肝 传代并置于37oC、5％CO：、饱和湿度的培养箱中。 (nonalcoholicfattyliverdisease，NAFLD)的病理生理基础，改 3 IR—HepG2细胞模型的建立与分组 善 IR对治疗 NAFLD有着至关重要的作用。脂联素受体2 IR细胞模型建立参照文献 。单层贴壁HepG2细胞 (adiponectinreceptor，AdipoR2)、过氧化物酶体增殖物激活受 用 FFA(0．40mmol／L)培养24h后，于4℃条件下用预冷 体 (peroxisome proliferative activated receptor，gamma， 0．01moL／L磷酸盐缓冲液 (PBS)洗涤细胞3次，即成为具有 PPA )和磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 (phosphoenolpyruvate IR的细胞模型。鉴定模型成功后，分别加入大黄素、小檗碱、 carboxykinase，PEPCK)是肝脏 IR形成的重要因素。大黄素、 吡格列酮为大黄素组、小檗碱组、吡格列酮组。实验分组 (5 小檗碱作为中药大黄和黄连的主要有效成分具有明显减轻 组)：正常组、模型组、大黄素组、小檗碱组和吡格列酮组。 IR大鼠肝细胞的脂肪变性 0。然而，在细胞水平研究大黄 4 模型鉴定 取培养液采用葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖含量(g／gpro— 素、小檗碱通过上述3个指标改善 IR的作用，国内外未见报 tein)。裂解细胞提取蛋白质，用 BrMoM微量法测定蛋 白浓 道。基于以上研究，我们应用高浓度的游离脂肪酸 (freefatty 度。培养液中葡萄糖含量 =样品吸光度值／标准管吸光度值 acid，FFA)诱导培养 HepG2细胞，建立 IR的细胞模型，并进 ×标准品浓度 (g／L)×1L／gprotein。细胞内糖原含量测定： 一