大鼠GLUT3启动子的克隆及其缺糖调控活性的测定.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 201l，27(11)：2147—2151 · 2147 · [文章编号] 1000—4718(2011)11—2147—05 大鼠GLUT3启动子的克隆及其缺糖调控活性的测定水 蒋广义 ， 郑传宜 ， 余 舰 ， 李军亮 ， 许新科 ，郑眉光 ， 李方成 (’中山大学孙逸仙纪念医院神经外科 ，广东 广州510120；海南医学院附属医院神经外科，海南 海 口570125) [摘 要] 目的：构建葡萄糖转运体3(GLUT3)启动子的报告基因，并在正常和缺糖情况下检测其转录活性。 方法：使用生物信息学软件预测了GLUT3的启动子序列，长度 1292bp，包含第 1个外显子，通过PCR及双酶切方 法 ，从大鼠全血基因组DNA中获得 GLUT3基因编码序列，包含 GLUT3启动子序列，然后克隆到报告基因pGL3一 Basic载体上，构建 GLUT3启动子的报告基因；用脂质体转染法将pGL3一GLUT3与胸腺嘧啶脱氧核苷激酶(pRL— TK)共转染入PC12细胞 中，以pRL—TK载体作内参照，分别给予正常和缺糖培养 ，采用双萤光素酶报告系统评估 GLUT3启动子的活性。结果：经PCR方法扩增出GLUT3启动子序列，测序与GenBank序列一致；转染后检测显示， 该pGL3一GLUT3明显具有转录活性，而且在缺糖24h情况下其双萤光素酶活性有明显升高。结论：成功构建出 GLUT3启动子报告基因，pGL3一GLUT3表现出很好的缺糖诱导活性，缺糖24h是研究pGL3一GLUT3在缺糖情况 下转录调控很有意义的时间点。 [关键词】 基因，GLUT3；启动子 ；缺糖；荧光素酶报告基因；转录调控 [中图分类号] Q78 【文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．11．020 CloningofratGLUT3promoteranddetermination 0fitsactivityunder glucosedeprivation JIANGGuang—yl一，ZHENG Chuan—yl。，YU Jian ，LIJun—liang ，XU Xin—ke， ZHENG Mei—guang ．LIFang—cheng (D‘epartmentofNeurosurgery，SunYat—senMemorialHospital，SunYat—senUniversity，Guangzhou510120，China； DepartmentofNeurosurgery，TheAffiliatedHospital，HainanMedicalCollege，Haikou570125，China．E—mail：sjwkli@ 163．corn) [ABSTRACT] AIM：Toconstructtheluciferasereportergenevectorcontainingthepromoterofrat ucosetrans— portertype3(GLUT3)geneandtoidentifythetranscriptionalactivityofthepromoterinnormalandlowducosecondi— tions．M ETHODS：ThepromotersequenceofGLUT3 genewaspredictedbythesoftwareofbioinformatics，which has 1292bpinlengthandcontainsthefirstexon．TheDNA ofthepromoterwasacquiredfrom ratwholebloodbyPCRanddu- alrestrictionenzymedigestion，andwasclonedintoluciferasereportervectorpGL3一Basic．ThereportergenevectorpGL3 一 GLUT3containingGLUT3promoterwascotransfectedwithpRL—TK(thymidine