α-平滑肌肌动蛋白和E-钙依赖性黏附素在肾间质纤维化大鼠肾组织中的表达.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(4)：795—798 · 795 · [文章编号] 1000—4718(2009)04—0795—40 仪一平滑肌肌动蛋 白和 E一钙依赖性黏附素在 肾间质 纤维化大鼠肾组织中的表达 陆海英， 张 悦 ， 刘煜敏， 周 娟， 陆 敏， 刘克剑， 李 靖， 林 敏 (上海中医药大学，上海 201203) [摘 要] 目的：检测单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾间质纤维化模型肾组织 中 一平滑肌肌动蛋白 (仅一SMA)和E一钙依赖性黏附素(E—Cad)表达的动态变化 ，并观察比较在肾小管间质纤维化不同阶段的病理变 化。方法：采用 54只雄性健康SD大鼠随机分为正常组 、假手术组和模型组，模型组行左侧输尿管结扎术，正常组 21d处死6只动物，假手术组和UUO组分别于术后 3、7、14、21d各处死6只动物，共48只，取肾组织常规行HE染 色、六胺银染色光镜下观察，取肾皮质电镜下观察病变情况。采用蛋白印迹法检测。肾组织 一SMA、E—Cad蛋白表 达。结果：(1)随着造模时间的延长，肾小管间质纤维化逐渐加重，UUO术后21d的肾小管扩张与萎缩均明显，肾 间质有大量的纤维化组织出现。(2)与假手术组相比，模型组肾组织 d—SMA于术后第3d即表达增加，并随梗阻 时间延长表达逐渐增加 ，至UUO术后21d达高峰。21d模型组与假手术组比较，有显著差异 (P0．01)。(3)而 E—Cad蛋白于术后第3d即表达降低，并随梗阻时间延长逐渐降低。结论：在 UUO阻塞性肾病中， —SMA蛋白 表达呈时间依赖性上调 ，而E—Cad蛋白表达呈时间依赖性下调 ，提示在阻塞性肾病中，肌纤维母细胞的活化是一 个动态的过程 ，可能与肾小管上皮细胞转分化有关。 [关键词】 d一平滑肌肌动蛋白；钙粘着糖蛋白类；输尿管梗阻；肾纤维化 [KEYWORDS] d—smoothmuscleactin；Cadhefins；Ureteralobstruction；Renalfibrosis [中图分类号】 R318．16 [文献标识码] A 肾间质纤维化是多种肾脏疾病发展至肾功能衰竭的共 技术公司)；小 鼠抗人 一平滑肌肌动蛋 白单抗 (仅一SMA， 同病理过程 ，它和肾功能的关系较肾小球硬化与肾功能的关 Sigma)；小鼠抗人 E一钙黏蛋 白单抗 (eadhefin，Sigma)；HRP 系更为密切。其发病机制迄今为止仍未得到完全阐明。通 — GAPDH(上海康成生物工程公司)；HRP耦联的兔抗小鼠 常认为是多因素综合作用的结果，涉及肾脏固有细胞转化成 IgG单抗 (北京中杉金桥公司)。 肌纤维母细胞并在肾间质中聚集、细胞外基质合成增多及降 1．2 仪器 低温高速离心机 (Eppendorf)；凝胶成像和图像 解减少、促纤维化细胞因子表达上调、单核巨噬细胞等炎症 分析系统 (上海复 日科技公司)；光学显微镜 (Olympus)；TEC— 细胞的浸润、氧 自由基生成过多及清除减少及肾间质细胞凋 NAIl2透射电镜 (Philips)；垂直电泳槽、转移电泳仪 (北京市 亡等方面。肾问质纤维化是以细胞外基质 (extraeellularma— 六一仪器厂)；752型紫外可见分光光度计 (上海第三分析仪 trix，ECM)的不断积 聚和 (It一平滑肌肌动蛋 白( 一smooth 器厂)；全 自动生化分析仪 (日立 7170A)。 muscleactin，0【一SMA)阳性的肌纤维母细胞的不断新生、活 2 方法 化为特征的过程。对于肾间质纤维化病理进展的研究追根 2．1 动物模型的建立和分组 雄性 SD大鼠54只，SPF级 ， 溯源，转分化途径正是关注的焦点… 。笔者动态观察单侧输 体重 (220±20)g，由上海中医药大学实验动物中心提供。动 尿管梗阻(unilateralureteralobsturction，UUO)大鼠肾间质纤 物合格证号：SCXK(沪)2003一D002。普食喂养，动物按体重 维化模型中 —SMA和E一钙依赖性黏附素 (E—cadhefin，E 分层，随机 (随机排列表法)分 3组：(1)正常组 (contro1)； — cad)表达变化 ，旨在探讨其在肾间质纤维化