PKC-α、δ亚型在AVP改善缺氧处理VSMC反应性中的作用及其与MLC20磷酸化调节的关系.pdfVIP

· 54 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(1)：54—58 [文章编号] 1000-4718(2009)叭一0054—05 PKC一 、6亚型在 AVP改善缺氧处理VSMC反应性 中的作用及其与MLC20磷酸化调节的关系 杨光明， 徐 竞， 李 涛， 明 佳， 陈 玮， 刘 良明 (第三军医大学大坪医院野战外科研究所第二研究室，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室，重庆400042) [摘 要] 目的：探讨蛋白激酶 c(PKC)一ft．、6亚型在精氨酸血管加压素(AVP)改善缺氧处理血管平滑肌细 胞(VSMC)反应性中的作用及其与肌球蛋白轻链 (MLC：。)磷酸化、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和肌球蛋白轻链磷酸 酶(MLCP)的关系。方法：贴块法取大鼠肠系膜上动脉(SMA)血管平滑肌细胞原代培养并传代至第3—5代后用于 实验，观察缺氧 1．5h后 PKC一 、8亚型抑制剂处理对 AVP调节VSMC收缩反应性的影响，以荧光素标记的牛血 清白蛋白在Transwell小室中的渗透率变化反映VSMC的收缩反应性 ；用酶反应法测定缺氧VSMCMLCK／MLCP活 性。同时取失血性休克大鼠(30mmHg，2h)SMA，观察 PKC一0I、8亚型在 AVP调节休克血管MLC20磷酸化水平 (Westernblotting)中的作用。结果：PKC—d抑制剂G66976预处理可明显抑制AVP引起的缺氧VSMC收缩反应 的升高，而PKC一8抑制剂rottlerin也部分抑制AVP的作用。缺氧VSMC的MLCP活性明显升高、MLCK活性降低， 同时休克血管平滑肌的MLC。磷酸化水平降低 ；AVP预处理可使缺氧VSMCMLCP活性降低、MLC 磷酸化水平升 高，而舶 6976可明显拈抗 AVP的作用，rottlerin仅有轻度的抑制作用。AVP和PKC— 、8抑制剂对 MLCK活性的 变化无明显影响。结论：AVP通过调节血管平滑肌细胞MLCP活性和MLC磷酸化水平来恢复休克后血管反应性 和钙敏感性，PKC—OL是其 中重要的调节分子。 [关键词] 血管平滑肌细胞；缺氧；蛋白激酶C；精氨酸升压素 [中图分类号] R363 [文献标识码] A Role0fPKC一仅and6isoformsinAVP improvedcontractileresponseof VSMC afterhypoxiaand itsrelationstoMLC20ph0sph0rylati0n YANGGuang～ming，XUJing，LITao，MINGJia，CHENWei，LIULiang—ming (StateKeyLaboratoryofTrauma，BurnsandCombinedInjury，Department2，ResearchInstituteofSurgery，DapingHospi— tal，TheThirdMilitaryMedicalUniversity，Chongqing400042，China．E—mail：Liuliangming2002@yahoo．corn) [ABSTRACT] AIM：ThepresentstudywastoinvestigatetherolesofproteinkinaseC0【and8isoforms(PKC— ， 8)inargininevasopressin(AVP)improvedcontractileresponseofvascularsmoothmusclecells(VSMC)tonorepi— nephrine(NE)afterhypoxiaanditsrelationstomyosinlightchain(MLC2o)phosphorylation，myosinlightchainphospha． tase(MLCP)andmyosinlightchainkinase(MLCK)activity．METHODS：PrimaryculturesofVSMCwereobtainedfrom thesuperiormesentericartery (SMA)ofratsbyexplant