miR-126对EA．hy926细胞血管内皮生长因子表达的调控作用.pdfVIP

· 3O · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2014，30(1)：30-34 [文章编号] 1000—4718(2014)01．0030．05 miR-126对 EA．hy926细胞血管内皮生长因子 表达的调控作用 郑志伟 ， 朱志伟 ， 郑 滢 ， 陈 蕾 (汕头大学医学院附属肿瘤医院 药学部 ，内科 ，广东 汕头515031) [摘 要] 目的：探讨 miR-126对 EA．hy926细胞血管 内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法：选用 EA．hy926细胞株作为研究对象，采用阳离子介导的转染方式 ，将 miR-126inhibitor和 miR-126mimics进行细胞转 染，分析miR-126对血管内皮细胞功能的影响。采用转染negativecontrol作为阴性对照，转染 36h后提取细胞总 RNA，利用 real-timePCR和Westernblotting分别检测EA．hy926细胞 VEGFmRNA和蛋白水平的表达。结果：转染 miR．126inhibitor50nmol／L36h后，EA．hy926细胞的VEGFmRNA及蛋 白水平各组 间差异有统计学意义 (P 0．01)，与阴性对照组相比，miR-126inhibitor使 EA．hy926细胞的VEGFmRNA及蛋白水平显著上调(P0．01)；转 染miR一126mimics50nmol／L36h后，EA．hy926细胞的VEGFmRNA及蛋白水平各组间有显著差异(P0．01)，与 阴性对照组相比，miR．126mimics使 EA．hy926细胞的VEGF在mRNA及蛋白水平显著下调(P0．01)。结论： miR一126能够抑制VEGF的表达，VEGF有可能是其调节的靶基因之一。 [关键词】 RNA干扰；miR-126；血管内皮生长因子；EA．hy926细胞 [中图分类号] R363 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000．4718．2014．叭．005 miR-126 regulatesexpression ofvascular endothelialgrowth factor in EA．hy926cells ZHENG Zhi．wei，ZHU Zhi．wei，ZHENGYing ，CHEN Lei (却 口，聊 ofPharmacy，Depanme~ofMedwine，CancerHospitalofShantouUniversityMedwalCollege，Shantou 515031，China．E-mail：zhiweizheng@126．corn) [ABSTRACT] AIM ：ToexploretheeffectsofmiR-126ontheexpressionofvascularendothelialgrowthfactor (VEGF)inva．scuIraendothelialcelllineEA．hy926．METHODS：EA．hy926cellswereculturedinvitroandtransfected withmiR一126mimicsormiR一126inhibitorbycation-mediatedtransfectionmethod．ThetotalRNA wasextractedfrom the culturecells36haftertrnasfectionofmiR-126mimicsormiR一126inhibitor．TheexpressionofVEGFatmRNA andprotein levelswasdetectedbyreal-timePCRnadWestern blotting．RESULTS：Th irty-sixhoursaftertrnasfectionofmiR-126in- hibitoratconcentrationof50nmol／L，theexpressionofVEGFatmRNAandproteinlevelsincreased