miRNA在去甲斑蝥素致K562细胞凋亡中的作用研究.pdfVIP

史垦痘理生理杂基 ChineseJournalofPathophysiology 2011，27(3)：499—503 · 499 · 【文章编号] 1000-4718(2011)o3一o499—05 miRNA在去 甲斑蝥素致 K562细胞凋亡中的作用研究 张 帅，李有杰 ，张 超 ，岳 真，张文娟，刘在贵 ，谢书阳 (。滨州医学院生物化学教研室 ，医学分子遗传学研究所 ，烟台山医院，山东 烟台264003) [摘 要] 目的：探讨miRNA在抗肿瘤药物去甲斑蝥素(DMC)诱导 K562细胞凋亡过程中的作用。方法： DMC诱导细胞凋亡后，通过基因芯片技术分析miRNA表达改变，进一步用RT—PCR和定量PCR验证部分 miRNA 的表达变化 ；并应用基因信息软件分析miRNA相关的基因，ELISA验证相关基因表达情况。结果：DMC致凋亡组 。 基因芯片技术检测到290多种miRNA的表达发生明显改变，用 RT—PCR和定量 PCR分析结果示：在 DMC处理 组，miR一16、miR一34a和miR一125等表达增高 1．5倍以上，而miR一106和miR一150的表达降低60％以上。通 过 microRNATargetScan和miRanda软件分析发现癌基因(6c2—2、 、 乃)和抑癌基因(RB1、p53)表达可能受 上述miRNA表达的调控。ELISA结果示：在 DMC组，RB1和P53蛋白表达显著增高，而Bcl一2、E2F1和 E2F3蛋白 的表达显著降低。结论：DMC能诱导K562细胞发生凋亡，并能引起细胞内miRNA及相关基因的表达发生改变。 [关键词] 去甲斑蝥素；细胞凋亡；微小RNA；基因表达 [中图分类号] R733．7 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．03．015 EffectofmiRNAson apoptoticleukemia cellsinduced by demethylca- ntharidin ZHANGShuai，LIYou—jie，ZHANGChao，YUEZhen，ZHANGWen—juan，UU Zai—gul’。．XIE Shu—yang ( 5t eofMedwalMo~cdarGenetics，DepartmentofBiochemistryandMo~cMarBiology，BinzhouMedcialUnwersi- ty，YantaishanHospital，Yantai264003，China．E—mail：shuyangxie@yahoo。corn．cn) [ABSTRACT] AIM：ToexploretheroleofmiRNAexpressionintheprocessofantitumordrugdemethyleanthari- din(DMC)一inducedleukemiacellapoptosis．METHODS：K562ceilsweretreatedwithDMCtoinduceapoptosis．Mi- cmarrayassessmentWas performedtodetectthechangesofmiRNAs．TheexpressionofmiRNAsWasfurtherdetectedbyRT — PCR andreal—timePCR．ThemiRNA—relativegeneswereanalyzedbygeneinformation~ftwares，andtheirexpression Was determinedbyELISA analysis．RESULTS：Th eresultsofmicroarrayshowedthatmorethna 290miRNAswere differ- entiallyexpressedafterDMCheatment．TheexpressionofmiR一16。miR一34andmiR一125increasedatmorethan1．5 f0ldsinDMC treatmentgroupdetemr ine