miRNA-122促进小鼠胚胎干细胞源性肝前体细胞的分化与成熟.pdfVIP

· 1260 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013，29(7)：1260．1267 [文章编号] 1000-4718(2013)07-1260．08 miRNA-122促进小鼠胚胎干细胞源性 肝前体细胞的分化与成熟 邓小耿 ，邱荣林，伍耀豪， 李治熹， 曾乐祥， 张 杰，周嘉嘉，唐 晶， 邓洁敏 (中山大学孙逸仙纪念医院小儿外科 ，广东 广州510120) [摘 要] 目的：通过miRNA．122(miR．122)转染胚胎干细胞(ESCs)源性肝前体细胞 ，观察及评估其是否能 推进ESCs向肝细胞的分化过程。方法：采用丁酸钠 、成纤维细胞生长因子4(FGF-4)及地塞米松 (Dex)联合序贯 诱导小鼠ESCs使之初步分化为肝前体细胞，然后利用Gateway技术构建出pAY．Exld—CMVmiR122／l砒 eGFP 重组腺病毒表达载体，使其转染贴壁诱导第9天的小鼠ESCs源性肝前体细胞，获得稳定高表达miR-122的细胞后 继续培养。采用荧光显微镜观察转染后细胞形态的变化；使用real—timeRT-PCR检测肝特异性基因的表达；免疫荧 光检测肝特异性蛋白表达水平；吲哚氰绿摄取实验、糖原染色及尿素合成功能实验检测肝细胞功能。结果：丁酸 钠、FGF-4及Dex联合序贯诱导可将小鼠ESCs成功地诱导为肝前体细胞。转染miR一122后 ，细胞在形态学上更接 近成熟肝细胞；肝特异性基因白蛋白(ALB)、甲状腺素运载蛋白、o1【抗胰蛋白酶、葡萄糖一6磷 酸酶、细胞角蛋 白8、 胆固醇7ct一羟化酶及细胞色素P4503A4的mRNA表达均增高；肝特异性蛋白ALB及细胞角蛋白18均表达增高， 而甲胎蛋白表达降低；吲哚氰绿摄取实验、糖原染色及尿素合成功能实验结果均显示转染miR．122后肝细胞功能 较对照组明显增强。结论 ：丁酸钠、FGF-4及 Dex联合序贯诱导可将小鼠ESCs成功地诱导为肝前体细胞；miR-122 能够有效地促进小鼠肝前体细胞的分化与成熟。 [关键词】 胚胎干细胞；肝细胞；miRNA．122 [中图分类号] R363 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2013．07．021 miRNA-122promotesmouseembryonicstem cell-derivedhepaticprecur- sorcellsto rentiateintohepatocytes DENGXiao-geng，QIURong-lin，WUYao—hao，LIZhi—xi，ZENGLe-xiang，ZHANGJie， ZHOUJia-jia．TANGJing，DENGJie．min (DepartmentofPediatricSurgery，SunYat—senMemorialHospital，SunYat-senUniverstiy，Guangzhou510120，China．E- mail：dengxiaogeng@yahoo．com．cn) [ABSTRACT] AIM：ToinvestigatewhethermiRNA-122(miR-122)promotesthedifferentiationofmouseembry- onicstemcell(ESC)一derivedhepaticprecursorcells(HPCs)intohepatocytes．METHODS：MouseESCswereinitially inducedtodifferentiateintoHPCsbystimulatingwithfibroblastgrowthfactor4(FGF-4)，sodiumbutyrateanddexametha- sone(Dex)sequentially．ThenarecombinantadenovirusexpressingvectorpAV．Exld-CMVmiR-122／IRES／eGFPwag constructedbyGatewaytechnologyn