PRL-2基因转染对肝细胞基质金属蛋白酶及其抑制剂表达的影响.pdfVIP

维普资讯 理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2006，22(11； 二 塑 · 2189 · [文章编号] 1000—4718(2006)11—2189—05 PRL一2基 因转染对肝细胞基质金属蛋 白酶 及其抑制剂表达的影响 程 超。^， 郭爱林 ， 吴伟康 ， 罗红鹤 ， 钟佛添 ， 张 萌 (’中山大学附属第一医院，广东 广州 510080； 广东省人民医院医学研究中心 ，广东 广卅I510080； 中山大学基础医学院病理生理教研室，广东 广州 510080) [摘 要] 目的：研究 PRL一2基因增强肿瘤细胞侵袭及转移能力的机制。方法 ：采用脂质体转染的方法将 PRL一2基因表达质粒转染至正常永生化肝细胞系CL1中，G418筛选阳性克隆。应用明胶酶谱法检测转染肝细胞分 泌MMPs酶谱变化，Westernblotting及RT—PCR检测转染肝细胞 MMP一2、MMP一9、TIMP一1和TIMP一2的变化。 以PRL一2磷酸酯酶特异性抑制剂处理转染细胞 ，观察抑制PRL一2活性对上述指标的影响。结果：经过 8周G418 筛选及 RT—PCR和Western blotting鉴定，获得稳定表达 PRL一2的细胞亚系PRL一2一CL1。转染后的CL1细胞分 泌MMP一9、活性型MMP一9和MMP一2，均显著高于转染前CL1细胞的MMPs分泌(P0．01)；使用特异性抑制剂 后，MMP一9、活性型MMP一9和MMP一2活性显著降低 (P0．01)。Westemblotting及RT—PCR检测显示PRL一2 一 CL1细胞MMP2、MMP9蛋白及 mRNA含量均较转染前显著升高 (P0．05)，TIMP一2则显著降低 (P0．05)；使 用抑制剂后，可以逆转上述变化。结论：PRL一2在永生化肝细胞中获得稳定 、高效表达，PRL一2基因增强肝细胞侵 袭及转移能力与其提高细胞 MMP2、MMP9表达，降低TIMP一2有关。 [关键词] 肝细胞；蛋白质酪氨酸磷酸酶；基因转染；基质金属蛋白酶 [中图分类号] R392．11 [文献标识码] A Expressionofmatrixmetalloproteinases(MMPs)and theirinhibitors (TⅡPs)inhepatocellularcelllinestransfectedbyPRL一2gene CHENG Chao ，GUO Ai—lin ，WU W ei—kang ，LUO Hong—he ，ZHONG Fo—tian ， ZHANG Meng (。TheFirstAffiliatedHospitalofSunYat—senUniversity，Guangzhou510080，China； MedicalResearchCenter，Guang— dongProvincialPeoplesHospital，Guangzhou510080，China ； DepartmentofPathophysiology，SunYat—senUniversity， Guangzhou510080，China) [ABSTRACT] AIM：ToinvestigatethepossiblemechanismofPRL一2ininvasivemetastasisoftumors．METH- ODS：ThePRL一2vectorwas transfectedintoCL1cellwithlipofectaminereagent，thetransfectantswereselectedbygrowth inthemedium supplementedwithG418．Zymographicanalysisofme