分泌型hCREG蛋白抑制人血管平滑肌细胞增殖的量效关系研究.pdfVIP

国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008,24(11)：2121-2125 · 2121 · [文章编号] 1000—4718(2008)11—2121—05 分泌型hCREG蛋白抑制人血管平滑肌细胞 增殖的量效关系研究 韩雅玲， 崔继福， 郭 亮， 康 建， 张效林， 闰承慧 (沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科，辽宁 沈阳 110016) 【摘 要] 目的：探讨hCREG表达与人血管平滑肌细胞增殖的量效关系。方法：构建强力霉素(Dox)调控 表达的pRevTRE—hCREG重组载体 ；分别经G418及潮霉素筛选表达pRevTet—On、pRevTRE—hCREG的人血管平 滑肌细胞株～HITASY细胞克隆；RT—PCR鉴定转染细胞克隆中抗性基因和插入基 因的表达；Westernblotting和免 疫共沉淀检测不同浓度的强力霉素诱导后，HITASY细胞内及培养上清中hCREG的表达；流式细胞仪检测不 同浓 度的强力霉素诱导后 ，hCREG表达与细胞增殖的关系。结果：成功构建了强力霉素可调控表达的pRevTRE— hCREG重组载体；筛选出稳定表达双抗性基因的HITASY—hCREG细胞克隆；RT—PCR检测证实细胞克隆中G418 及插入基因表达均为 阳性；Westernblotting及免疫共沉淀检测发现随强力霉素诱导剂量的增加 (0、0．01、0．1、 1mg／L)，HITASY—hCREG细胞及培养上清中hCREG表达均呈剂量依赖性增加；流式细胞周期分析提示 ，hCREG 表达增加后 ，HITASY—hCREG细胞的G。期细胞明显增加。结论：hCREG蛋白通过剂量依赖方式抑制人血管平滑 肌细胞的增殖。 [关键词] 阻遏蛋白质类；血管平滑肌细胞；细胞增殖 [中图分类号] R363．2 [文献标识码] A Relationship between dose of hCREG and proliferation of vascular smooth musclecellsin vitro HANYa—ling，CUIJi—fu，GUOLiang，KANGJian，ZHANGXiao—lin，YANCheng— hui (DepartmentofCardiology，ShenyangGeneralHospitalofPLA，Shenyang110016，China．E—mail：hanyaling@263． net) [ABSTRACT] AIM：ToelucidatetherelationshipbetweenthedosageofhumancellularrepressorofE1A—stimu． 1atedgenes(hCREG)andtheproliferationofvascularsmoothmusclecells(VSMCs)．METHODS：hCREGcDNAwas clonedintoaretroviralresponsevector(pRevTRE)controlledbytetracyclineresponsiveelement．Therecombinantvector (pRevTRE—hCREG)wasconstructedandconfirmedbysequencenaalysis．ThepRevTet—Onwasrtansferredintohumna VSMCs—HITASY invitroandselectedbyG418．ThepRevTRE —hCREGwastransferredintopRevTet一0n—HITASY clonesandselectedbyhygromycin．TheexpressionofG418andTREwasdetectedbyRT—PCRnaalysis ThehCREG ex-