高血压病和2型糖尿病患者血清损伤ECV-304细胞的比较研究.pdfVIP

理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2Q1o ()；! = ! · l753 · [文章编号] 1000-4718(2010)09—1753—06 高血压病和 2型糖尿病患者血清损伤 ECV一304细胞的比较研究 周永红 ， 陈利国 ， 屈 援。， 唐海兰 ， 程少冰 (暨南大学 医学院中医系，管理学院，实验技术中心，广东 广州510632) [摘 要] 目的：以高血压病和2型糖尿病为例进行血瘀证血管内皮细胞损伤模型的比较研究，为中医学 “异病同证”理论提供实验依据。方法：取对数生长期ECV一304细胞，分组如下：空白对照组(无血清的DMEM 组)、糖尿病血瘀证组(糖尿病血瘀证患者血清)和高血压病血瘀证组(高血压病血瘀证患者血清)。采用噻唑蓝 比 色法(MTI法)观察细胞活性 ；在倒置相差显微镜、扫描电镜和透射电镜下观察细胞形态的变化 ；应用放免法测定内 皮素(ET)含量 ；硝酸还原酶法测定一氧化氮 (NO)含量；利用双抗夹心酶联免疫法 (ELISA)检测各组细胞培养上清 液中内皮细胞蛋白C受体 (EPCR)、血管内假性血友病因子(vWF)和血栓调节蛋白(sTM)的含量；应用激光扫描共 聚焦显微镜 ，采用Fluo一3／AM作为荧光指示剂观察细胞内游离钙 ([ca“])浓度的变化；并采用荧光探针标记的 鬼笔环肽染色法观察细胞肌动蛋白微丝分布的差异。结果 ：(1)MTT结果显示，10％血清作用下，高血压病血瘀证 组的细胞活力低于对照组 (P0．05)，糖尿病血瘀证组的细胞活力也低于对照组 (P0．05)，但高血压病血瘀证组 的细胞活力与糖尿病血瘀证组差异无显著(P0．05)；(2)高血压病血瘀证组的ET水平高于对照组(p0．05)，糖 尿病血瘀证组也高于对照组(P0．05)，且高血压病血瘀证组的ET水平低于糖尿病血瘀证组(P0。05)；高血压 病血瘀证组的NO水平低于对照组(尸0．05)，糖尿病血瘀证组也低于对照组(P0．05)，且高血压病血瘀证组的 NO水平高于糖尿病血瘀证组(P0．05)；(3)高血压病血瘀证组 的EPCR、vWF和 sTM含量高于对照组 (P 0．05)，糖尿病血瘀证组也高于对照组(P0．05)，且高血压病血瘀证组 的EPCR水平低于糖尿病血瘀证组 (P 0．05)；而高血压病血瘀证组的vWF和sTM含量与糖尿病血瘀证组之间差异无显著(P0．05)；(4)高血压病血瘀 证组[ca“]．高于对照组(P0．05)，糖尿病血瘀证组[ca。]高于对照组(P0．05)，高血压病血瘀证组胞浆内 荧光分布不均匀，[Ca2]。高于糖尿病血瘀证组(P0．05)；(5)高血压病血瘀证组可见细胞骨架微丝减少但排列 较为规则，糖尿病血瘀证组的微丝断裂且排列紊乱 ，二者微丝分布差异显著。结论：高血压病患者血清和糖尿病患 者血清对ECV一340 细胞骨架、[ca“]及ET、NO和EPCR表达的影响不同，但均能造成ECV一340细胞损伤，这 可能是中医学 “异病同证”的病理学基础。 [关键词] 血瘀证 ；糖尿病，2型；血管内皮损伤 ；高血压 [中图分类号] R2—031 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2010．09．019 ComparisonofECV-304cellsinjuredbytheserafrompatients thhy- pertensionand type2diabetesmellitus ZHOUYong—hong，CHENLi—guo，QUYuan，TANGHai—lan，CHENGShao— bing (DepartmentofTraditionalChineseMedicine，MedcialCollege，ManagementSchool，CenterofExperimentalTechnology， JinanUnive~ity，Guangzhou510632，China．E—mail：tchenly@jnu．edu．cn) [ABSTRACT] AIM：TocomparethecellularinjurymodelofECV一340 indu