活性氧和ERK1／2信号通路在缺氧大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡中的作用.pdfVIP

· 36 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(1)：36—41 [文章编号] 1000—4718(2009)O1—0036—06 活性氧和 ERK1／2信号通路在缺氧大鼠 肺动脉平滑肌细胞增殖和凋亡中的作用 汤娜娜 ， 刘先胜 ， 徐永健 ， 倪 望， 陈士新 (华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸内科 ，湖北 武汉430030) [摘 要] 目的：研究缺氧状态下大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)内活性氧(ROS)水平的变化，ROS对细 胞外信号调节激酶(ERK)1／2蛋白表达的影响以及ROS和ERK1／2在PASMCs增殖和凋亡关系失衡中的作用。方 法：原代培养正常大鼠PASMCs，选用第2—3代用于实验。分别在常氧及缺氧条件下用ROS清除剂tiron、ERK1／2 抑制剂 PD98059进行分组干预。通过NBT还原法和DCFH—DA荧光探针检测细胞 内ROS，免疫荧光法检测磷酸 化 一ERK1／2(P—ERK1／2)蛋白表达，M1Tr比色法和增殖细胞核抗原 (PCNA)蛋白的免疫细胞化学法检测细胞增 殖，原位末端标记法 (TUNEL)检测细胞凋亡。结果：(1)缺氧组细胞内ROS水平明显高于对照组 (P0．01)；(2) 缺氧组的增殖活性与对照组相比显著增高 (P0．01)，而凋亡率显著降低 (P0．01)，使用tiron后能明显抑制缺氧 诱导的细胞增殖(P0．05)，而凋亡率却明显升高(P0．01)；(3)缺氧组P—ERK1／2蛋白表达显著高于对照组(P 0．01)，使用 tiron后缺氧诱导的P—ERK1／2表达被显著抑制(P0．01)；(4)使用PD98059也能明显抑制缺氧诱 导的细胞增殖 (P0．05)，而凋亡率也明显升高(P0．01)，缺氧下同时使用PD98059和tiron与单用tiron相比，对 细胞增殖和凋亡的影响均无明显差异 (P0．05)。结论：缺氧时PASMCs中生成增多的 ROS通过活化下游 ERK1／2信号通路，促进PASMCs增殖并抑制凋亡，从而在缺氧性肺动脉重建过程中发挥重要作用。 [关键词] 活性氧；细胞外信号调节激酶类 ；缺氧；肺动脉平滑肌细胞；细胞凋亡；细胞增殖 [中图分类号] R563 [文献标识码] A Roleofreactiveoxygen speciesmadERK1／2signanngpathwayinprolifera- tionandapoptosisof hypoxicratpulmonaryarterialsmoothmusclecells TANGNa—na，LIUXian—sheng，XUYong—jian，NIWang，CHENShi—xin (DepartmentofRespiratoryMedicine，TongfiHospitalAffiliatedtoTonalMedicalCollege，HuazhongUniversityofScience andTechnology，Wuhan430030，China．E—mail：liuxiansheng@珈．tjma．edu．ca) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatethechangeofreactiveoxygenspecies(ROS)productioninhypoxicpulmonary arterialsmoothmusclecells(PASMCs)ofrats，theeffectofROSontheexpressionofextracellularsignal—regulatedki— nase(ERK)1／2protein，andtheroleofROSandERK1／2intheimbalancebetweenproliferationandapoptosisof PASMCs．METHODS：PrimaryculturesofPASMCswereestablishedandcellsbetweenpassages2to3wereusedforex- periments．PASMCswer