活性氧及能量代谢障碍在体外培养肝细胞脂肪变性中的作用.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008，24(7) ? = !! · l373 · [文章编号] 1000—4718(2008)07—1373—05 活性氧及能量代谢障碍在体外培养 肝细胞脂肪变性中的作用木 胡巢凤， 陆大祥 ， 孙丽萍 (暨南大学医学院病理生理学教研室，广东 广州510632) [摘 要] 目的：探讨细胞活性氧(ROS)及线粒体能量代谢障碍在乙醇和小牛血清诱导的体外培养肝细胞 脂肪变性中的作用。方法：将人肝细胞株L02进行细胞培养，加入不同浓度的乙醇，采用 MTY法确定乙醇作用的 最佳浓度 ；用2％乙醇和50％小牛血清 (A+cs)诱导L02细胞 ，以油红O染色观察细胞内脂滴形成状况，并检测细 胞TG的含量；用流式细胞仪 (FCM)测定细胞活性氧及线粒体膜电位的改变；采用反相高效液相色谱分析法测定细 胞ATP含量。结果：2％乙醇和50％小牛血清作用36h，肝细胞内有典型的脂滴形成，与对照组相比，细胞内TG含 量及 ROS水平明显增加；而细胞线粒体膜电位及肝细胞ATP的含量则显著降低 (P0．叭)。结论 ：在乙醇和小牛 血清诱导肝细胞脂肪变过程中，细胞ROS的增加及线粒体能量代谢障碍可能发挥了重要的作用。 [关键词] 肝细胞；脂肪变性；活性氧 ；线粒体膜电位；能量代谢 [中图分类号] R575．5 [文献标识码] A RoleofROS and energy metabolism dysfunction in hepatocyteadipose degeneration ／n vitro HUChao—feng，LU Da—xing，SUN Li—ping (DepartmentofPathophysiology，MedicalCollegeof 眦 University，Guangzhou510632，China．E—mail：ldx@ “． edu．c,O [ABSTRACT] AIM：Toexploretheroleofreactiveoxygenspecies(ROS)andenergymetabolismdysfunctionin hepatocyteadiposedegenerationinducedbyalcoholandcalfserum (cs)．METHODS：ThegrowingL02cellsweretrea— tedwithdifferentconcentrationsof alcoho1．Toscreen theproperconcentrationofalcohol，theproliferationofcellswas measuredbyM1Tr．Lipiddropletsinthecellswereobservedthroughoilredstaining．Triglyceride(TG)contentwasdetec— tedwithnaalyzedkit．ThelevelofROSandchangesofmitoehondrialmembranepotential(AWm)incellsweretestedby floweytometry．Reversed—phasehighperformanceliquidchromatography(RP—HPLC)wasappliedtoassaythecellular ATPcontent．RESULTS：Lipiddropletswereobservedunderlightmicroscopeinthecellstreatedwith2％ alcoholand 50％ cs(A+cs)for36h．Comparedtocontrolgroup，thecellularTGnadROSlevelsinmodelgroupmrakedlyincreas