人NKX3．1基因启动子的克隆及在不同肿瘤细胞系中启动子活性的测定.pdfVIP

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2015-08-04 发布于江西
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人NKX3．1基因启动子的克隆及在不同肿瘤细胞系中启动子活性的测定.pdf

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中国病理生理

维普资讯国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2006,22( )；二丝 · 1987 · [ArticleID] 1000—4718(2006)10—1987一O6 CloningofhumanNKX3．1genepromoterandassayofitspromoter activityin differenttumorcelllines JIANGAn—li，ZHANGPeng—ju，HUXiao—yan，CHENWei—wen， HEMei—lan，KONGFeng，ZHANGJian—ye△ (DepartmentofBiochemistry，MedicalSchoolofShandongUniversity，Jinan250012，China) A『BSTRACT] AIM：Tostudythebasicmechanismoftranscriptionalregulation，NKX3．1genepromoterwas clonedanditsDmmoteractivitiesinprostatecancercelllinesand othercancercelllinesweretested．METHODS： 1．04 kb—DromoterfragmentofNKX3．1genewas obtainedbyPCR andclonedintopG —basicna dpEGFP一1thatare Dromoter一1essreportervectorstoexamineitspromoteractivitydrivingthereportergenetranscription．Thepromoteractivity wasdeterrninedbvdua1一luciferasereporterassayandtheexpressionofGFPrepo rterobserved underfluorescencemlero- scope．RESULTS：Thesequenceofthecloned1．40 kbpromoterprovedtobecorrectbyDNAsequencing．Thedual—lu‘ ciferasereporterassay(M1／M2)showedthatthepromoteractivityinLNCaPcelltransfeetedwithpGIJ3—1．40 kbpromoter wasabout1．5一foldhigherthanthatofpGL1一controltransfectionand50一foldhigherthanthatofpGL3一basictransfec’ tion．Toinvestigatethe1．40 kb—promoteractivityindifferenttumorcelllines，theconstructedpGIJ3—1．40 kbpromoter andpEGFP一1．40 kbpromoterweretransfeetedintoseveralcelllines，respectively．Theresultsshowedthattheactivityof 1．40 kbDmn1oterinLNCaPwashighestamongthetestedcelllines．Multipleconsensussequenceelementshavebeeniden— tiedwithinthe1．40 kbflagmentusingTRANSFACdatabase．Furtherexperimentswillbedonetodeterminetheirfoune‘ tions．CONCLUSION ：Cloned1．40 kbrfagmentu