腺病毒E1A蛋白抑制大鼠肺泡上皮细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位表达的机制研究.pdfVIP

· 2382· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008，24(12)：2382—2385 [文章编号] 1000—4718(2008)12—2382—04 腺病毒E1A蛋白抑制大鼠肺泡上皮细胞 一谷氨酰 半胱氨酸合成酶催化亚单位表达的机制研究术 方 怡 ， 李 冰 ， 陈 娟 ， 刘启才 ， 冉丕鑫 (广州医学院 广州呼吸疾病研究所，实验医学研究中心，广东 广州 510120) [摘 要] 目的：研究腺病毒 ElA蛋 白抑制大鼠肺泡上皮细胞 一谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位 (GCLC)表达的机制。方法：构建稳定表达腺病毒 E1A蛋白的大鼠肺泡上皮细胞 ，将 GCLC基因5’一上游调控序 列不同长度的缺失体一萤火虫荧光素酶报道系统转染后分析转录活性的变化；检测AP一1、NF—KB、USF与GCLC 基因调控序列的结合活性。结果：GCLC基因5’一上游调控序列报道系统检测结果显示大部分(9／11)缺失体的转 录活性抑制，AP一1、NF—KB、USF与 GCLC基因的结合活性增强，而对应的功能元件的转录活性降低。结论：腺病 毒 E1A蛋白通过抑制GCLC基因5’一上游调控序列的转录活性，扩大大鼠肺泡上皮细胞氧化应激时的氧化／抗氧 化失衡 ，其机制可能涉及E1A对辅助转录因子的抑制。 [关键词] 腺病毒E1A蛋白质类 ； 谷氨酰半胱氨酸合成酶；肺疾病 ，慢性阻塞性 [中图分类号] R363 [文献标识码] A AdenovirusE1A protein downregulates the gamma --glutamylcysteine systhetaseinratalveolarepithelialcells FANGYi，LIBing，CHENJuan，LIUQi—cai，RANPi—xin (’GuangzhouInstituteofRespiratoryDiseases， ExperimentalMedicalResearchCenter，GuangzhouMedcialCollege， Guangzhou510120，China．E—mai：pxran@gzhme．edu．en) [ABSTRACT] AIM：ToanalyzethemechanismofGCLCinhibitionbyadenoviruslatentinfectioninratalveolar epithelialcells．METHODS：Theratalveolra epithelial cellswerestablytransfectedwiththeplasmidpEIAneoandcontrol plasmid．Fordetectingthefactorsinvolvinginthetranscriptioninhibition，11deletionmutantsofthe5’一flankingregionof ^y—GCSGCLCgeneweretransfectedintothecellsandthetranscriptionalactivitywasdeterminedbyluciferaseactivityas- say．EMSA wasusedtodetemr inethebindingactivitiesofAP一1。NF—KBandUSF．RESULTS：Thetranscriptionalac— tivityof9／11deletionmutantswasrepressedbyE1A protein．ThebindingactivitiesofAP一1，NF—KBandUSFwerein- creased，butthetranscriptionalactivitiesofthecorrespondingelementsweredecreased．CONCLUSION：Adenoviruslatent infectionamplifiestheoxidant／antioxidantimbalancebyrepressingthepromotertranscriptional activityofGCLC．Sincethe DNAbindi