腺病毒介导反义C-myc联合咖啡因在骨肉瘤化疗中增效作用的实验研究.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2007，23(11)：2173—2178 · 2l73 · [文章编号] 1000—4718(2007)11—2173—06 腺病毒介导反义C—myc联合咖啡因在骨肉瘤 化疗中增效作用的实验研究木 解先宽， 杨迪生 ， 叶招明， 陶惠民 (浙江大学医学院附属第二医院骨科 浙江 杭州310009) [摘 要] 目的：构建重组反义c—myc腺病毒并探讨其与咖啡因对人骨肉瘤MG一63细胞顺铂化疗的影响。 方法：应用基因重组技术，将约750bp的人 c—myceDNA反向克隆到腺病毒载体，构建表达反义c—myc的重组腺 病毒(Ad—Asc—myc)，与咖啡因、顺铂单独或联合体外作用于人骨肉瘤MG一63细胞，采用蛋 白免疫印迹(Western blotting)、MTY、流式细胞仪(FCM)、透射电镜等检测c—Myc蛋白、 一2、bax、E2F一1等基因表达、瘤细胞体外增殖 抑制、凋亡及细胞周期 ，分析Ad—Asc—Myc、咖啡因对人骨肉瘤 MG一63细胞顺铂化疗的影响。结果：成功构建 Ad—Asc—myc，滴度可达2×10pfu／L，体外转染 MG一63细胞48h后 ，可降低c—Myc蛋白表达，并抑制其体外增 殖；Ad—Asc～myc、2．0moL／L咖啡因分别与浓度为2．0、5．0mg／L顺铂共同作用后 ，可增加顺铂对MG一63细胞的 体外增殖抑制率；Ad—Asc—myc联合2．0moL／L咖啡因能明显加强顺铂的体外抗肿瘤作用，凋亡相关基因 一2基 因表达下降，bax表达上升，而E：F一1表达无明显变化；FCM检测显示Ad—Asc—myc的转染可诱导骨肉瘤细胞凋 亡，并增加顺铂诱导瘤细胞凋亡作用；单独咖啡因不能诱导瘤细胞凋亡，但能增加顺铂诱导瘤细胞凋亡作用；Ad— Asc—myc联合2．0moL／L咖啡因能明显加强顺铂诱导瘤细胞凋亡作用。细胞周期分析显示顺铂作用后瘤细胞出 现 s期阻滞 ，而咖啡因则能逆转这种阻滞；Ad—Asc—myc转染的骨肉瘤细胞 出现 G：／M期阻滞。结论：腺病毒介 导反义c—myc联合咖啡因能明显增强顺铂对人骨肉瘤 MG一63细胞的诱导凋亡及化疗作用。 [关键词] 骨肉瘤；基因，c—myc；咖啡因；腺病毒 [中图分类号] R363 [文献标识码] A Enhancementeffectofadenovirusmediated antisensec--mycgeneand caffeineonchemotherapyofosteosarcomacellstocisplatin XIEXian—kuan，YANG Di—sheng，YEZhao—ming，TAlO Hui—min (DepartmentofOrthopaedics， Second Hospital，z^慨 UniversitySchoolofMedicine，胁 M310009，Chn／a．) [ABSTRACT] AIM_,Thecancerbiologyhasshowedthatoverexpressionofoncogenesisresponsiblefortheprogres- sionofhumanmalignancies，anti~nsetechnologycna blockacertaingeneexpression．Caffeinehasenhnacementeffecton chemotherapyofosteosarcomacellstocisplatin，weconstructedtherecombinantadenovirus(Ad—Asc—myc)encodingnati- sensec—mycfragmentna dinvestigateditseffectontheinvitrosensitivityo