香烟烟雾提取物通过PKC途径促进大鼠肺动脉平滑肌细胞bFGF表达.pdfVIP

· 1228· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2008，24(6)：1228—1230 [文章编号] 1000—4718(2008)06—1228—03 香烟烟雾提取物通过 PKC途径促进大 鼠 肺动脉平滑肌细胞 bFGF表达 胡 静 ， 徐永健 ， 张珍祥 ， 田 锋 (华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸科，湖北 武汉 430030) [摘 要] 目的：研究香烟烟雾提取物 (CSE)对大鼠肺动脉平滑肌细胞 (PASMCs)碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)表达的影响及蛋白激酶 c(PKC)信号转导途径在其中所起的作用。方法：组织块法培养正常 Wistar大鼠 PASMCs。5％CSE作用于PASMCs不同时间及PASMCs先与PKC特异性抑制剂Ro31—8220预孵育，然后再暴露于 5％CSE，逆转录一聚合酶链反应 (RT—PCR)检测PASMCsbFGFmRNA表达，免疫细胞化学检测bFGF蛋 白表达。 结果：对照组PASMCs中有少量 bFGFmRNA和蛋 白表达 (分别为0．093±0．034，0．142±0．013)。暴露于5％CSE 后4h细胞内bFGFmRNA和蛋 白表达增加，mRNA于8h达高峰(0．436±0．103，P0．01)，蛋白于 12h达高峰 (0．237±0．031，P0．01)，此后逐渐下降，但24h都仍高于对照组。Ro31—8220预孵育可显著抑制5％CSE诱导 的bFGFmRNA和蛋 白表达增加。结论：5％CSE可通过激活PKC途径促进大鼠PASMCsbFGF的表达。 [关键词] 吸烟；成纤维细胞生长因子2；肺动脉；蛋 白激酶C [KEYWORDS] Smoking；Fibroblastgrowthfactor2；Pulmonaryartery；ProteinkinaseC [中图分类号] R363 [文献标识码] A 吸烟可促进肺动脉平滑肌细胞 (PASMCs)增殖，导致肺 院实验动物 中心提供)，体重 150—200g，6％水合氯醛 血管的重建，直接参与肺动脉高压的形成，但具体机制尚不 5mlMkg腹腔注射麻醉后，腹主动脉放血处死动物，开胸迅速 清楚，可能与吸烟致气道和血管壁的细胞以旁分泌或 自分泌 取出心肺 ，浸入预冷无菌的含 1×10 U／L青霉素、100mg／L 形式产生的多种生长因子、血管活性物质及细胞因子的复杂 链霉素的D—Hanks液中，分离左右肺 内动脉，在解剖显微镜 的相互作用有关 。。在吸烟合并 COPD的患者中，碱性成 下用眼科镊剥去外膜，擦去 内皮后把血管剪成 1mm ×1mm 纤维细胞生长因子 (bFGF)在肺小动脉平滑肌细胞的表达增 ×1mm 的组织块，均匀摆放在培养瓶中，加含 20％FCS的 加 ，但关于香烟烟雾对体外培养的PASMCsbFGF表达的 DMEM置 37oC、5％CO2、21％02培养箱中静止培养 5d。一 直接影响及其可能的机制，目前尚未见研究报道。本研究 旨 般5—7d即可见细胞从组织块边缘爬出。原代培养的细胞 在观察香烟烟雾提取物 (CSE)对培养的大鼠PASMCsbFGF 80％一90％长满瓶底后，用0．125％胰蛋 白酶消化传代 ，传代 表达的影响，并探讨蛋 白激酶 C(PKC)信号通道在其中的作 后用含 10％FCS的DMEM进行培养。第3—6代的细胞用于 用。 实验 。 3 香烟烟雾提取物的制备 材 料 和 方 法 参照Ohmanns等 方法，稍做改动。将 1支过滤嘴香烟 1 试剂和仪器 点燃 ，其过滤嘴端接 1根橡皮管 ，橡皮管的另 1端接注射器进 武