三种复方对慢性应激模型大鼠海马CREB、BDNF基因表达的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(3)：591—594 · 591 · [文章编号] 1000—4718(2009)03—0591—04 三种复方对慢性应激模型大鼠海马 基因表达的影响 于 琦 ， 金光亮 (北京中医药大学中医基础理论系，北京 100029) [摘 要] 目的：探讨慢性应激肝郁模型大鼠海马CREB、BDNF基因表达及疏肝、疏肝健脾与健脾 3种方剂 的效应。方法：SD雄性大鼠40只，用随机区组设计的方法分为对照组、模型组 、四逆散组 、逍遥散组和四君子汤 组，多种应激处理共21d后 ，测定 1％蔗糖水摄取率和强迫游泳 中累计不动时间，用 RT—PCR的方法检测海马 CREB和BDNFmRNA表达。结果：与对照组比较，模型组大鼠1％蔗糖水摄取率明显降低，强迫游泳中累计不动 时间明显延长，海马 CREB、BDNFmRNA表达明显降低；与模型组比较，四逆散组 、逍遥散组的1％蔗糖水摄取率明 显升高，强迫游泳中累计不动时间明显缩短 ，CREB、BDNFmRNA表达均明显升高；四君子汤组各行为学指标及 BDNF表达与模型组相比没有差异，仅 CREB表达升高。结论 ：慢性应激肝郁模型大鼠海马CREB、BDNF的mRNA 表达降低，具有疏肝作用的方剂四逆散和逍遥散可以对抗这种降低，而健脾方剂四君子汤无明显效应。 [关键词] 应激；中草药；cAMP反应元件结合蛋白质；脑源性神经营养因子 [KEYWORDS] Stress；Drugs，Chineseherbal；cAMPresponseelementbindingprotein；Brain—derivedneuro— trophicfactor [中图分类号】 R285．5 [文献标识码] A 肝郁证是临床常见的基础证候，情志刺激是其主要病 2 试剂与仪器 因，多见于与慢性应激密切相关的疾病。为了深入研究肝郁 BDNF引物序 列为，BDNF一1GGGGTTAGGAGAAcT— 证的发生发展机制，我们建立 了慢性应激肝郁证大 鼠模 CAAGC，BDNF一2CAGTGGGACTCCAGAAGACA，扩增 片段 型 J。在本研究中，我们根据国际上有关慢性应激影响海马 288bp；13一actin引物序列为，上游引物 ATCATGrITIGAGAC— 神经元再生机制的新认识，研究 了慢性应激肝郁模型大鼠海 CTYCAACA，下游引物 CATCTCIqGCTCGAAGTCCA，扩增片段 马内与神经元再生相关的蛋白：环磷酸腺苷反应元件结合蛋 318bp；均用Primer5软件 自行设计 ，由北京奥科生物公司合 白(cAMPresponseelementbindingprotein，CREB)、脑源性神 成。CREB引物序列为，CREB一1TCAGCCGGGTACTACCAT— 经营养因子 (brain—derivedneurotrophicfactor，BDNF)的基 TC，CREB 一2TCTCTTGCTGCrITrCCCTGrrI1，扩 增 片段 252 因表达变化，并观察了四逆散、逍遥散、四君子汤 3个不同治 bp_4；北京赛百盛生物公司合成。RNA酶抑制剂、M—MLV 法代表方剂的干预作用。 逆转录酶、M—MLVRT一5×reactionbuffer(Promega)；dNTPs (10mmol／L，pH7．5)，Genview；2×taqPCRmix(欣源佳和公 材 料 和 方 法 司)；无水乙醇 (北京化学试剂公司)；异丙醇、三氯 甲烷 (北京 1 药物 化学试剂公 司)；TrizolReagent(Gibco)；琼脂糖 (Biowest)。 根据 《方剂学》 确定方剂的组成，其中逍遥散(《太平惠