胚胎干细胞直接向神经细胞诱导分化的实验研究.pdfVIP

维普资讯 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2006，22(11)：2081—2085 [文章编号]1000—4718(2006)11—2081—05 ·论 著 · 胚胎干细胞直接 向神经细胞诱导分化的实验研究 肖 迎 ， 唐仕波 ， 黄 冰 ， 王 琪 ， 孟 晶， 林少芬 (中山大学中山眼科中心，广东 广州 510060) [摘 要] 目的：探讨不经拟胚体 (EB)培养阶段，应用维甲酸 (RA)在体外直接将胚胎干细胞 (ESC)诱导分 化为神经细胞的可行性和效果。方法：ESC消化后分为 A、B、c、D4组 ，A、B组进行 EB培养后 ，A组用 RA进行诱 导分化 ，B组不添加RA使其 自由分化，c、D组不经 EB培养阶段 ，c组直接用RA诱导分化，D组 自由分化。倒置 相差显微镜及扫描电镜观察细胞形态变化 ，免疫细胞化学及流式细胞术观察各组第 9d分化细胞微管相关蛋白一 2(MAP一2)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况。结果 ：A、c组诱导分化的神经样细胞逐渐增多，并形成密集 的神经网络样结构，9d时大部分为MAP一2阳性细胞，MAP一2阳性率显著高于B、D组 (P0．01)。B、D组以圆 形上皮样分化细胞为主，9d时绝大部分为 GFAP阳性细胞，GFAP阳性率显著高于A、c组 (P0．01)。A、C组之 间或B、D组之间的MAP一2及GFAP阳性率均无显著差异 (P0．05)。结论：在体外，可不经EB阶段 ，应用 RA直 接将ESC诱导分化为神经细胞，改良的ESC诱导分化方法与传统的RA4一／4+方法效果相同，可取代传统方法。 [关键词] 干细胞；细胞分化 ；细胞培养；神经元 [中图分类号] R363 [文献标识码] A Directdifferentiation ofembryonic stem cells into neuralcellswithout embryonicbodycultureperiodin vitro XIAOYing，TANGShi—bo，HUANGBing，WANGQi，MENGJing，LINShao—fen (ZhongshanOphthalmicCenter，SunYat—senUniversity，Guangzhou510060，China．E—mail：sbtang@gzsums．edu．ca) [ABSTRACT] AIM：Toinvestigatethefeasibilityandeffectofdirectlydifferentiationofembryonicstemcells (ESC)intoneuralcellsinducedbyretinoidacid(RA)withoutembryonicbody(EB)cultureperiod vitro．METH． ODS：ESC weredigestedanddividedinto4groups：groupA na dB wereundergoneEB culturing．Afterthat．cellsin groupA wereinducedbyRA ，cellsingroupB weredifferentiatedspontnaeously，cellsingroupC werecommittedlyin— ducedbyRAdirectlywithoutEBculturing，andcellsingroupDweredifferentiatedspontnaeouslywithoutEBperiod ．Mor- phologicchangeswereobservedunderinvertedmicroscope nadscnaningelectronmicroscope．MAP一2nadGFAPwerede． tectedbyimmunocytochemistryandflow c