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中国病理生理
维普资讯
中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2007,23() 二 · l63 ·
[文章编号】 1000-4718(2(XY/}O1-0163—05
葡萄球菌肠毒素 A基因原核表达系统的构建
及其表达产物的鉴定水
徐水凌 .一, 毛亚飞。,、张梅光 , 罗冬娇’, 严 杰。△
(浙江大学医学院病原生物学教研室,浙江杭州310031; 嘉兴学院医学院微生物与免疫学教研室,
浙江 嘉兴 314001; 杭州师范学院基础医学部 ,浙江 杭州 310018)
【摘 要】 目的:构建葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因原核表达系统,了解重组表达产物 rSEA促淋巴细胞增殖
和抑制肿瘤生长的作用。方法:采用高保真PCR从金黄色葡萄球菌ATCC13565株DNA中扩增全长 SEA基因片段,
T—A克隆后测序 ,构建SEA基因原核表达系统pET32a—SEA一层co/B/L21DE./。采用 SDS—PAGE检测rSEA表达
量,Ni—NTA亲和层析法提纯rSEA。采用TCIDso法测定rSAE 对 Vem细胞的细胞毒性并计算TCICso值。采用 MTr
比色法分别检测不同浓度rSEA体外对小鼠脾细胞、人外周血单个核细胞(PBMC)的促增殖作用以及对 HepG2细胞
(人肝癌细胞)、HeLa细胞(人宫颈癌上皮细胞)的生长抑制作用。结果:与公布的相关序列比较,所克隆的SEA基
因核苷酸序列相似性为 100%。rSAE 表达量约为细菌总蛋白的25%。rSEA对Veto细胞的1、cIC∞为3.14 。1.0
— 2o.0m L的rSEA对小鼠脾细胞和人PBMC均有明显的促增殖作用(P0.05)。5.0—20.0mg/LrSEA作用的人
PBMC上清均能有效地抑制HepG2细胞和HeLa细胞生长(P0.o5)。结论:成功地构建了rSEA原核表达系统。
rSEA仍然具有生物学活性。所建立的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的检测方法,为以后减毒
rSAE 突变体的筛选奠定了基础。
【关键词】 葡萄球菌肠毒素A;基因表达;原核表达;HepG2细胞;HeIJB细胞;Veot细胞
【中圈分类号】 R363 【文献标识码】 A
Constructionandidentificationofprokaryoticexpressionsystem ofstaphy-
lococcalenterotoxinA ge矾 andexpressedproduct
)c Shui—ling ·,MAOYa—feli,ZHANGMei—gu趿g2, LUODong—jiao,YANJie
(D‘E帕,l朋lofMedicalMicrobiologyandParasitoloyg, Unizers~ SchoolofMedicine, 呐 l3‘10031,Chn/a.
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_ bp@ 础 .‘cn;DepartraetgofMedicalMciroboiolyg andImmunoloyg,MedicalSchoolofJiaxingCollege,
如瑚 314001,Chn/a;凡嘶 ofBasicMedicine, 哪 ⅡNormalCollege,Hanohou310018,‰ )
A【】B cR Cr] AIM_.ToconstructapmkaryoticexpressionsystemofstaphylococcalentemtoxinA (SEA)geneand
determinetheeffectsof therecombinantexpressionproductrSEA inpromotinglymphocyteproliferationandinhibitingHlmor
cellgrowth
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