赖型钩端螺旋体溶血素HlyX对血管内皮细胞通透性的影响.pdfVIP

· 1682· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2011，27(9)：1682—1686 [文章编号] 1000—4718(2011)09—1682—05 赖型钩端螺旋体溶血素HIyX对 血管内皮细胞通透性的影响 孙 湛， 吴秉婷， 李道坤，鲍 朗 (四川大学华西医学中心感染免疫研究室，四川 成都 610041) [摘 要] 目的：克隆表达赖型钩端螺旋体溶血素基 因hlrX，观察其表达产物对人脐静脉内皮细胞 (HU VECs)通透性的影响，并初步探讨其机制。方法：将 hlyX基因插入原核表达载体 pET32a(+)，构建重组质粒pET — hlyX，转化大肠杆菌BL21(DH3)以高效表达携带组氨酸标签的Trx～HlyX融合蛋白，并作亲和层析纯化。采用 生物素标记白蛋白的酶联免疫吸附法测定 目的蛋 白对 HUVECs单细胞层通透性的影响，并以流式细胞术及 Ho- echst33258荧光染色方法检测其作用于HUVECs后的细胞凋亡率。结果：成功构建了重组质粒pET—hlyX并高效 表达出Trx—HlyX融合蛋白；与对照组相比较，蛋白Trx—HlyX作用于HUVECs后 ，明显增加其通透性(P0．05)， 细胞凋亡率显著增加 (P0．05)。结论 ：重组质粒pET—hlyX高效表达出Tr)【一HlyX融合蛋白，纯化后的融合蛋白 对HUVECs通透性有影响，且对HUVECs具有细胞毒性作用。 [关键词] 钩端螺旋体 ；HlyX；通透性；细胞凋亡；人脐静脉内皮细胞 [中图分类号] R363 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．09．OO4 ． EffectofhemolysinproteinHIyX ofLeptospirainterrogansserovarLaion permeabilityofvascularendothelialcells SUN Zhan ，WU Bing—ting ，LIDao—kun ，BAO Lang (DepartmentofPathophysiology，XinjiangMedicalUniversity，Urumqi830000，China；LaboratoryofInfectionandlm— munity，West—China CenterofPreclinicaland ForensicMedciine，SichuanUniversity，Chengdu610041，China．E—mail： baolang@sea．edu．cn) [ABSTRACT] AIM：TocloneandexpressthehemolysingenehlyXofLeptospirainterrogansserovarLaiandtoin— vestigatetheeffectoftheexpressionproductonthepermeabilityofhumna umbilicalveinendothelialcells(HUVECs)． METHODS：TherecombinantplasmidpET—hlyXwasconstructedbyinsertingthe geneintoprokaryoticexpression vectorpET32a(+)，andtransformedintoE．coliBL21(DH3)toexpressthefusionproteinTrx—HlyXwithaHis—tag． ThefusionproteinwaspurifiedusingHisTrapaffinitycolumns．Thepemr eabilityofthemonolayerHUVECswasmeasured byenzyme—linkedimmunosorbentassayforbiotin—labeledalbumin．Flow cytometryandHoechst33258stainingwere印- pliedtomeasuretheapop