小凹蛋白-1下调人脐静脉内皮细胞外钙敏感受体介导的钙内流的作用机制.pdfVIP

堡生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013，29(4)：577-583 · 577 · [文章编号] 1000—4718(2013)04-0577．07 · 论 著 · 小凹蛋 白-1下调人脐静脉 内皮细胞外钙敏感受体 介导的钙 内流的作用机制水 钟 华 ， 龚 艳 ， 吴玲玲 ， 赵 慧 ， 王 静 ， 孙志萍 ， 邓峰美 ， 何 芳 ．2△ (石河子大学医学院 新疆地方病与民族高发病教育部重点实验室 ， 病理生理教研室，’医学机能实验中心，新疆 石河子 832002) [摘 要] 目的：研究小凹蛋白一1(Car一1)对人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)细胞外钙敏感受体 (CaR)介导钙 内流的作用机制。方法：取2～3代HUVECs，采用细胞膜穴样凹陷(caveolae)结构破坏剂非律平(filipin)和甲基．B． 环糊精 (MI3CD)及 Cav—J基因沉默，配合CaR激动剂精胺 (spermine)和负性变构调节剂 Calhex231。Fura-2／AM负 载检测细胞内Ca“浓度([Ca“]；)。Westernblotting检测 HUVECs中Cav-1以及CaR蛋白表达，免疫共沉淀技术 检测Cav一1和CaR相互作用。用蔗糖密度梯度离心的方法提取并鉴定caveolae，Westernblotting检测caveolae的标 志蛋白Cav-1和浮舰蛋白 1(flotillin一1)及 CaR表达。同时检测胞膜 、胞浆和高尔基体标志蛋 白：转铁蛋白受体 (TfR)、B-肌动蛋白(pa·etin)和B-夕被体蛋白(B．COP)。检测富含Cav．1膜(CEM)区、非caveolaeI区 (NCFI)和II 区(NCFII)的Cav-1和 CaR表达。结果：(1)细胞外液为含钙液时，Calhex231完全阻断精胺刺激引起的[Ca ]； 升高(P0．05)，MBCD可加强精胺升高[ca ]；的作用 (P0．05)。不同浓度MBCD处理后各组 Cav．1和CaR相 互作用的差异无统计学意义 (P0．05)；(2)免疫共沉淀结果显示，各组Cav．1和CaR蛋白表达的差异无统计学意 义 (P0．05)；(3)与control组 比较，spermine+Ca2组 、filipin+spermine+Ca2组和 MBCD+spermine+Ca。组 CEM区的 Cav-1和CaR蛋白表达均降低 (P0．05)，NCFI区的Car-1和CaR蛋白表达增加(PO．05)，NCFII区 Cav·1蛋白表达增加 (P0．05)，而CaR蛋白表达的差异无统计学意义(P0．05)。结论：在HUVECs中，Cav．1和 CaR共定位于同一caveolae区，同时Cav-1对 CaR介导的ca“内流有下调作用 ，其机制可能与Cav．1抑制CaR膜定 位、促使其向非caveolae区转位及减弱其对激动剂的反应性有关。 [关键词] 小凹蛋白一1；人脐静脉内皮细胞；受体，钙敏感 ；钙信号 [中图分类号] R363 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2013．40．001 Roleofcaveolin-1indown-regulatingextracellularCa -sensingreceptor- mediatedCa influxinhumanumbilicalveinendothelialcells ZHONGHua ，GONG Yan ，WU Ling．1ing ，ZHAO Hui，WANG Jing，SUN Zhi． ping ，DENG Feng-mei，HE Fang’ (KeyLaboratoryof~njiangEndemicandEthnicDiseases，胁 ofEducation，DepartmentofPathophysoilogy，Centre ofMedcialFunctoinalExperiments，MedcialCollegeofS