小干扰RNA沉默hPTTG1基因对卵巢癌细胞增殖和凋亡的影响.pdfVIP

· 102 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2011，27(1)：102—107 [文章编号] 1000—4718I2011)叭 一0102—06 小干扰 RNA沉默hPTTG1基因对卵巢癌细胞 增殖和凋亡的影响 刘 洁 ， 沈文静。， 卢 瑶 ， 赵 恂 ， 宋 敏 (中国医科大学 实验技术中心72附属第-it$床学院妇科 ，病理教研室，辽宁 沈阳 110001) [摘 要] 目的：利用RNA干扰技术沉默人垂体瘤转化基因1(hPTTG1)表达，观察卵巢癌细胞增殖能力和 细胞凋亡的改变并探讨分子机制。方法：化学合成靶定hPTTG1的小干扰RNA(siRNA)转染体外培养的A2780细 胞，RT～PCR和Westernblotting检测hPTTG1及c—myc表达水平；Mar法和[’H]一TdR掺人实验检测hPTTGI对 细胞增殖的影响；annexinV／PI染色流式细胞术和TUNEL法测定各组细胞凋亡情况。结果：hPTTG1siRNA转染组 hPTTG1mRNA和蛋白表达下降，抑制率分别为70．5％±3．9％和63．8％±4．5％；转染hPTTG1siRNA24h细胞吸 光度值开始下降，48h抑制效果最明显，抑制率为42．9％-4．5．2％；转染hPTTG1siRNA后细胞[H]一TdR放射性 计数明显低于空白组和阴性对照组；hPTTGIsiRNA干扰组细胞存活率下降，细胞凋亡率和坏死率均增加；TUNEL 染色分析结果可见hPTTG1siRNA干扰组凋亡指数明显高于空白组和阴性对照组；hPTTG1干扰后c—mycmRNA 和蛋白表达均下调。结论：hPTTG1siRNA通过下调c—myc表达抑制A2780细胞增殖，诱导细胞凋亡，hPTTGI可 作为卵巢癌基因治疗的候选靶点。 [关键词】 基因，人垂体瘤转化；卵巢肿窟；细胞增殖；细胞凋亡；c—myc [中图分类号] R737．31 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．01．020 EffectofhPTTG1siRNA onproliferationandapoptosisofovariancancer ceils LIUJie，SHENWen—jing，LUYao，ZHAOXun，SONGMin (ExperimentalTechnologyCenter，DepartmentofMaternity， FirstAffiliatedHospital；DepartmentofPathology，Chi- 。MedicalUniversity，Shenyang110001，China．E— ： 152003@163．corn) [ABSTRACT] AIM_．Toobservetheproliferationandapoptosisofovarinacancercellsbysilencingtheexpression ofhumanpituitarytumor—transforminggene1(hPTTG1)usingRNAinterferencetechnique．METHODS：Thechemically synthesizedsiRNA targetinghPTTG1wastransfectedintoova~ancancercelllineA2780in “ ．Theexpressionlevelsof hPTTGIandc—mycwereexaminedbyRT—PCRandWestern blotting．CellproliferationwasmeasuredbyMTYeolorimet· ricassayand[H]一TdRincorporationtest．CellapoptosiswasdetectedbyflowcytometrywithannexinV／PInadTUNEL labeling．RESULTS：TheexpressionofhPTTGIatmRNA andproteinlevel