小鼠肌源性干细胞高表达CD34、Sca-1、Bcl-2和desmin.pdfVIP

· 332 · 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2011，27(2)：332—337 [文章编号] 1000—4718(2011)02—0332—06 小鼠肌源性干细胞高表达 CD34、 Sca一1、Bcl一2和 desmin水 韦 拮， 张金 明 ， 安 庚， 冀晨阳， 潘淑娟 (中山大学孙逸仙纪念医院整形外科，广东 广州 510120) [摘 要] 目的：探讨小鼠肌源性干细胞 (MDSCs)的生物学特性和表型。方法：取小鼠骨骼肌，用酶分步消 化，应用差速贴壁法进行纯化获取MDSCs，观察细胞的形态，对MDSCs分别进行增殖能力、克隆形成率和融合情况等 鉴定；通过流式细胞术、免疫荧光法及免疫印迹法 (Westernblotting)等检测初步确定细胞表型。结果：经差速贴壁法 获取的MDSCs为圆形或短梭形细胞，聚集成簇，呈对数生长；细胞倍增时间(9．69-1-2．08)h，克隆形成率(13．35± 2．54)％；细胞在高汇合度 (50％)或低血清 (2％FBS)培养时，极易融合成肌管或肌细胞链；流式细胞术和免疫荧 光技术鉴定：CD34、Sea一1、Bcl一2和 desmin在原代MDSCs中的表达均 9o％；Westernblotting检测显示随着细胞 的纯化 ，desmin表达越来越强，ot—SMA表达越来越弱。结论：MDSCs通过差速贴壁法获取时纯度较高，它具有高 水平表达 CD34、Sca一1、Bcl一2和desmin的生物学特性，这4种蛋 白可作为鉴定 MDSCs的标志物。MDSCs增殖 旺盛，可在体外大量扩增，是组织工程研究的一种新型种子细胞。 [关键词] 肌源性干细胞；Preplate技术；细胞表型；CD34；干细胞抗原1；蛋白质 Bcl一2；结蛋白 [中图分类号] R363 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000-4718．2011．02—023 HighexpressionofCD34，Sca一1，Bcl一2anddesminproteinsinmouse muscle．．derivedstem cells WEIZhe，ZHANGJin—ming，ANGeng，JIChen—yang，PANGShu—juan (DepartmentofPlasticandReconstructiveSurgery，SunYat—senMemorialHospital，SunYat一8e1$University，Guangzhou 510120，China．E—mail：zxmrwk@yahoo．con．eft) [ABSTRACT] AIM：Toexplorethecharacteristicsandphenotypeofthemuscle—derivedstemcells(MDSCs)of mouse．METHODS：Skeletalmusclespecimenswereharvestedfrom C57BL／6miceof2weeksold．Preplatetechnique wasappliedtoisolateMDSCs．ThecellulargrowthstatusandmorphologyoftheprimaryMDSCswereobserved．Thesphere — forming，proliferationanddifferentiationassayswereperfomredandflowe~ometry(FCM)，immunoeytochemistryand WesternblottingwereusedtocharacterizeMDSCs．RESULTS：Theisolatingprocesscontained6consecutivedaysofdiffer- entiatedattachment．MDSCswereroundorshortspindle—shapedcells．ThegrowthcurveofMDSCsshow