小鼠胰岛体外培养及格列吡嗪促胰岛素分泌实验.pdfVIP

维普资讯 国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiolo~t 2006,22(12)：2491-2492,2496 · 249l · [文章编号] 1000—4718(2006)12—2491—03 小鼠胰岛体外培养及格列吡嗪促胰 岛素分泌实验 术 胡红梅’， 赵嘉咏 ， 王一飞 ， 崔蕴霞 ， 李久香 (’华南理工大学体育学院基础理论系，广东 J~4H510630； 广州暨南生物医药研究开发基地 ，广东 广卅l510632； TouehstoneCenterforDiabetesResearch．UniversityofTexasSouthwesternMedicalCenter，Texas，USA75390—8854) [摘 要] 目的：探索小鼠胰岛细胞分离纯化方法及其在体外培养中的胰岛素分泌规律。方法：对小鼠胰岛 分离方法在心脏灌注、消化酶选择 、分级分次消化和低温处理4方面进行改进 ；采用免疫发光法测定培养胰岛的基 础相、葡萄糖刺激 、格列吡嗪刺激下的胰岛素分泌。结果：获得了一定数量、功能 良好的体外培养胰岛。结论：探索 了体外培养胰岛细胞的胰岛素分泌规律，以及格列吡嗪促胰岛素分泌特性，为体外培养胰岛细胞的进一步应用萸 定了基础。 [关键词] 胰岛；格列吡嗪；胰岛素 [KEYWORDS] IsletofLangerhans；GIipizide；Insulin 【中图分类号] R363 【文献标识码] A 胰岛细胞体外培养可应用于多方面研究，如胰 岛移植， 4 胰 岛的分离 胰岛素分泌机制研究，降糖药物作用机制研究，以及药物筛 KM小鼠腹腔注射戊 巴比妥钠麻醉剂 (1％浓度，每只注 选等。因此，近几年，胰岛细胞分离纯化技术得到不断改进， 射0．15mL)，待小鼠四肢无力，但仍有呼吸时，沿腹 f【1线剪 尤其是大鼠胰岛的分离纯化技术研究较多0。，小鼠因其胆总 开，打开胸腔，暴露心脏，心脏灌注 HBSS10m1，充盈胰腺。 管细小及灌注难度大，在应用上受到限制。但是，小 鼠独有 沿 胃下 、十二指肠到脾脏剪下胰腺，HBSS清洗后移人小烧杯 的成本低 、易饲养管理、易操作等优势使其更具有潜在的应 内，加少许消化酶液，剪碎成约 1InIn×1InIn×1mm大小，移 用价值 。本实验拟通过对小鼠胰岛分离方法的改进，以期 人 15mL离心管，加入酶液至6mL，37℃水浴25rain，观察消 获得纯净而有活性的胰岛，并观察其在体外培养中的分泌规 化程度，有砂状颗粒出现时，取出组织液，在小培养皿 内按组 律，以及格列吡嗪促胰岛素分泌的作用，为体外培养胰岛细 织块大小分级 ，已消化解离成雪片状的组织加少 ：酶液，继 胞的进一步应用奠定基础。 续消化 5rain；较大块组织加较多酶液，继续消化 10—15min， 消化过程中勤观察，消化成细砂状的绀织及时用大量冷的终 材 料 和 方 法 止液终止消化 (称为分级分次消化法)、终止液 内的组织于 1 实验动物及试剂 4℃，2000r／rain离心2rain 弃上清，终止液洗组织 1次，离 动物为雄性KM小鼠，20—25g，购 自广州市实验动物中 心。 心。LiberaseRIEnzyme购 自Roche公司，Ficoll400为 Phar 5 胰岛的纯化 macia分装 ，RPMI一1640为 Gibco 产品。格列吡嗪片为普强 将上一步的沉淀重悬 j=4mL，25％ Ficoll，混匀，依次缓 苏州制药有限公司生产。胰岛素测试试剂盒为美国雅培公 慢各加2m1下列浓度的Ficoll：23％、20％、11％，形成梯度， 司产品。 3800~rain，室温离心20rain，胰岛定位住 20％层和它的界 2 消化