小鼠巨噬细胞内表达结核分枝杆菌CFP10-ESAT6融合蛋白对细胞增殖和凋亡的影响.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 20 (10)： ： · 18O9 · [文章编号] 1000—4718(2013)10-1809—06 小鼠巨噬细胞 内表达结核分枝杆菌 CFP10-ESAT6 术 融合蛋 白对细胞增殖和凋亡的影响 任 琳， 李 轶， 王山梅， 师 娟， 郭 思 (河南省人民医院感染控制科 ，细菌室，河南 郑州450000) [摘 要] 目的：建立培养滤液蛋 白1O-早期分泌性抗原靶 6(CFP10一ESAT6)真核表达质粒并转染 RAW264．7巨噬细胞，观察胞内表达 CFPIO．ESAT6对细胞活性及凋亡 的影响，并初步探讨其机制。方法：将 CFPIO．ESAT6融合基因插入真核表达质粒pEGFP．N1，构建重组质粒，转染 RAW264．7巨噬细胞。采用 MTF的方 法测定 CFP10一ESAT6融合蛋白对 RAW264．7巨噬细胞活性的影响，采用结核分枝杆菌 19kD脂蛋 白和十字孢碱 (staurosporine)处理RAW264．7巨噬细胞，并以流式细胞术检测细胞凋亡率以及 Toll样受体2(TLR2)的表达。结 果：成功构建 了重组质粒 pEGFP．N1／CFP10一ESAT6并转染至 RAW264．7巨噬细胞；与对 照组相 比，胞 内表达 CFP10一ESAT6不能影响巨噬细胞的活性，但可以明显抑制结核分枝杆菌19kD脂蛋白所造成的凋亡(P0．05)，并 显著抑制了TLR2的表达 (P0．05)。结论 ：巨噬细胞内表达的CFP10一ESAT6融合蛋白不具有细胞毒性作用，但 可以通过下调TLR2的表达来抑制结核分枝杆菌 19kD脂蛋白所造成的凋亡。 [关键词] 结核分枝杆菌；培养滤液蛋白10；早期分泌性抗原靶6；巨噬细胞；细胞增殖；细胞凋亡 [中图分类号] R363 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000-4718．2013．10．015 Effectsofintracellular expression ofMycobacterium tuberculosisCFP10． ESAT6fusionproteinonproliferationandapoptosisofmousemacropha- geS REN Lin，LIYi。WANGShan．mei，SHIJuan，GU0Si (DepartmentofInfectionControl，LaboratoryofMedicalMicrobiology，HenanProvincialPeople’sHospital，Zhengzhou 450000，China．E—mail：iamgxy@163．con) [ABSTRACT] AIM ：ToestablishMycobacteriumtuberculosisculturefiltrateprotein10(CFPIO)-earlysecretory antigenictraget6(ESAT6)eukaryoticexpressionvectorandinvestigatetheeffectofintracellularexpressionofCFP10一ES— AT6fusionproteinontheproliferationnadapoptosisofmousemacrophages(RAW264．7cells)．METHODS：Therecom- binantplasmidpEGFP-N1／CFPIO—ESAT6wasconstructedbyinsertingCFPIO—ESAT6fusiongeneintoeukaryoticexpres— s1o‘nvectorpEGFP．N1．andthentransfectedintoRAW264．7cellstoexpressCFP1