小鼠血管内皮损伤／再生伴内膜增生模型的建立.pdfVIP

维普资讯 理生理 志-ChineseJournalofPathophysiology 2007，23(10)：2071—2073 · 2071· [文章编号】 1000～4718(2007)10—2071—03 · 实验技术 · 小鼠血管内皮损伤／再生伴 内膜增生模型的建立半 谭红梅 ， 赵明奇 ， 吴伟康 ， 孙 娟 ，李 艳 ， 罗汉川 ， 梁天文 (中山大学中山医学院病理生理教研室 ，广东 广州510089；广州市儿童医院中心实验室， 广东 广州 510120， 中山大学中山医学院教学中心实验室，广东 广州 510089) [摘 要] 目的：探讨如何建立稳定的小鼠血管内皮损伤／再生及内膜增生模型。方法：用改良的空气干燥 法造成小鼠颈总动脉内皮剥脱损伤模型。术后活体灌注Evans蓝染料以评估受损内皮再生情况，并取受损部分动 脉作纵向切片，行 CD31内皮细胞标志抗原检测。术后4周常规组织学检测内膜增生肥厚情况。结果：内皮损伤 术后内皮完全剥脱，Evans蓝染色完全，未见CD31抗原表达 ，随着术后时问延长，Evans蓝染色部分从损伤边缘开 始，逐渐向中心区缩小，CD31抗原表达逐渐增多。术后7d仍可见部分损伤血管未再内皮化。术后4周可见明显 新生内膜增生。结论 ：用改 良的空气干燥法可以建立稳定的小鼠动脉内皮损伤／再生模型 ，并且伴有明显的新生内 膜增生。 [关键词】 颈动脉损伤；内皮细胞；内膜增生 [KEYWORDS] Carotidinjury；Endothelialcells；Intimalhyperplasia [中图分类号] R363 [文献标识码] A 内皮细胞损伤或内皮细胞功能异常在动脉粥样硬化的 小鼠模型，力求建立一种更加稳定且重复性好的内皮剥脱损 发病过程中发挥重要作用。研究发现…，在高胆固醇血症的 伤模型。如图1A所示，夹闭小鼠左侧颈总动脉近心端及颈 动物模型中内皮的完整性对于动脉粥样硬化的发生和发展 内动脉血流，在颈外动脉处朝近心端插管，以2个大气压的压 至关重要。经皮冠状动脉介入术是Et前治疗冠心病安全、有 力扩张动脉 1min，然后在近心端靠近结扎处戳一出气小孑L， 效和常用的方法，但经皮冠状动脉腔内成形术后3—6个月内 用恒流泵持续灌注空气(30mL／min)干燥内皮 15min。结扎 再狭窄发生率达 30％一50％，严重影 响了lYICA 的远期疗 颈外动脉，同时在出气孑L平面的血管壁不透壁穿线打一小结 效。血管内皮细胞的损伤、修复及功能改变在再狭窄的形成 标明损伤平面，松开近心端及颈内动脉恢复血液灌注。 过程中同样也起到重要作用。陆续有多项研究证实，内皮损 3 观察指标 伤是内膜增生的一个主要刺激因素。这些结果提示 ，维持内 3．1 动态观察受损内皮再生的情况 内皮损伤术后0、5、I 皮细胞的正常结构和功能在防治动脉粥样硬化和再狭窄中 和9d，分别进行 Evans蓝染色，以观察内皮再生的情况。小 可能具有非常重要的意义。本实验中，我们通过改 良Simon 鼠麻醉后，以 10mL／min的速度灌注 5％ Evans蓝染料 等 的动物模 型，建立了一个非常稳定 、重复性好 的动物 50mL，然后以PBS灌流冲洗血管，并用 10％甲醛固定。分离 模型。 切取两侧颈总动脉 ，纵向剪开血管，用微型针固定于硅胶解 剖板上，数码照相并计算 内皮再生的面积及 比例。左颈内外 材 料 和 方 法 动脉分支至出气孑L平面面积为内皮剥脱损伤的总面积 ，Evans 1 材料 蓝染色阳性(蓝色)部分面积为尚未再生的面积 ，两者之差为 性别、年龄相匹配的12周龄 C57BL／B6小鼠，体重 (25± 已再生面积，已再生面积 占损伤总面积的比例为已再生的比