小鼠神经元中CCK_8与EGF协同作用的初步研究.pdfVIP

主垦痘理生理盘查 』malofPathophysiology 2011，27(4)：779—782 [文章编号] 1000—4718(2011)04—0779—40 小鼠神经元 中CCK8与 EGF协同作用的初步研究 李 娟， 王 丽， 陈 熔， 刘晓燕， 梅志强， 何 涛 (泸州医学院医学分子生物学实验室 ，i~tjtl泸州 646000) [摘 要] 目的：探讨八肽胆囊收缩素(CCK)与表皮生长因子(EGF)在神经元信号转导中的交叉对话 (CROSS—talk)及可能存在机制 ，并对CCK 与EGF的协同作用进行初步研究。方法：CCK 刺激表皮生长因子受体 (EGFR)磷酸化的受体类型分析 ：培养的乳小 鼠神经元随机分为对照组 (等量的DMEM培养基)、CCK 刺激组 (10 mol／L)、CCKA受体拮抗剂L346 718组、CCKB受体拮抗剂 L365260组以及L346 718+L365260联合组(浓 度均为 10 mol／L)，拮抗剂加入 10min后再给予 CCK。，作用5min后收集细胞提取蛋白，Westernblotting检测磷 酸化表皮生长因子受体 (P—EGFR)蛋 白表达量的变化；CCK。与EGF对神经元EGFR磷酸化状态的影响和 CCK。 与EGF协同作用功效分析：培养的乳小 鼠神经元随机分为对照组、CCK。(10一’mol／L)组、EGF(4O g／L)组以及 CCK。+EGF组，药物作用5min后终止反应，处理和分析方法同前，同时通过 MTY法检测各组神经元培养不同时间 (24、48、72、96h)后细胞的生长活性。结果：(1)2种 CCK受体拮抗剂均可降低EGFR蛋白的磷酸化水平 ，其中A 型受体拮抗剂的作用明显强于 B型，2种拮抗剂同时作用对EGFR蛋 白磷酸化水平的降低作用更为明显；(2)CCK 和EGF分别刺激神经元后，EGFR的磷酸化水平均增强，但CCK8+EGF刺激后表现更为显著；(3)CCK8与EGF联 用对增强神经元生长活性和延长其存活时间的作用较两药单独作用效果更为明显(P0．05)。结论 ：(1)CCK 和CCK 受体均介导了CCK。激活EGFR磷酸化的信号转导途径，但A型受体发挥了更为重要的作用 ；(2)CCK 与 EGF信号转导途径之间存在着 CROSS—talk；(3)CCK。与EGF可能通过信号转导的CROSS—talk协同促进小鼠神经元 的生长与存活。 [关键词] 胆囊收缩素；神经元 ；受体，表皮生长因子 [中图分类号】 R322．81 [文献标识码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2011．40．030 CrosstalkofCCKRandEGF inmouseneurons 、 LIJuan，WANGLi，CHENRong，LIUXiao—yan，MEIZhi—qiang，HETao (MolecularBiologyLaboratory，LuzhouMedicalCollege，Luzhou466000，China．E—mail：Hetao198@163．corn) [ABSTRACT] AIM：Toexplorethemechanismofsignalingtrnasduetionandcrosstalkbetweencholecystokinin octapeptide(CCK8)andepidermalgrowthfactor(EGF)inmouseneuronsandtoobservetheeffectofCCK8ineoordina tionwithEGFonneuronrgowthandcellviability．M ETHODS：Fordetemr iningwhichkindofCCK receptormediatedthe phosphorylationofEGFreceptor，theculturedneuronswererandomlydividedintocontrolgroup，CCK8stimulationgroup， CCKAreceptorantagonistrgoup，CCKBreceptorantagonistrgoup，andCC