小鼠肺微血管内皮细胞的培养鉴定及其血管形成功能的研究.pdfVIP

· l86· 中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysi0Iogy 2012，28(1)．I86-I88,192 [文章编号] 1000—4718(2012)0l一0186—04 · 实验技术 · 小鼠肺微血管内皮细胞的 培养鉴定及其血管形成功能的研究 高润娣， 曹 婕， 卢 珊，应 琳， 高 璇， 陆国华，李和权， 周建英 (浙江大学医学院附属第一医院呼吸内科，浙江 杭州 310003) [摘 要] 目的：建立一种简单有效的小鼠肺微血管内皮细胞(PMVECs)原代培养方法，并对其体外血管形 成功能进行研究。方法：取小于 1周龄的C57BL／6小 鼠的肺组织边缘 ，采用组织贴块法培养原代 PMVECs。经形 态学观察、免疫细胞化学鉴定后，以每孑L2×10 的密度接种于铺有基质胶的96孔细胞板，在倒置显微镜下观察(2 h1次)其24h体外血管形成过程。结果：镜下可见原代培养的PMVECs呈梭形或多角形，单层融合呈铺路石样。 细胞抗Ⅷ因子相关抗原(YmF—Ag)染色阳性。免疫荧光显微镜下可见大部分细胞摄取四甲基吲哚碳花青标记的 乙酰化低密度脂蛋白(DiI—Ac—LDL)，胞质呈现红色荧光，细胞膜表面与异硫氰酸荧光素标记的异植物血凝素 (FITC—BSI)结合 ，呈现黄绿色荧光。PMVECs接种4—6h后出现明显的管腔结构，10—12h呈蜂窝状结构，此后 管腔结构逐渐减少。结论：组织贴块法培养原代PMVECs操作简单，细胞得率和纯度高，并可在体外成功建立血管 形成模型进行相关研究。 [关键词] 小鼠；肺微血管内皮细胞；原代培养；血管生成 [中图分类号] R322．13 [文献标志码] A doi：10．3969／j．issn．1000—4718．2012．叭．037 Primaryculture，identificationandinvitroangiogenesisofmousepulmo- narymicrovascularendothelialcells GAORun—di，CAOJie，LU Shan，YINGLin，GAOXuan，LUGuo—hua，LIHe—quan， ZH0UJian—ying (DepartmentofRespiratoryDiseases，TheFirstAffiliatedHospitalofCollegeofMedicine，ZhejiangUniversity，Hangzhou 310003，China．E—mail：zjyhz@zju．edu．ell,) [ABSTRACT] AIM：Toestablishasimpleandreliablemethodforprimarycultureofmousepulmonarymierovas— cularendothelialcells(PMVECs)，andtoinvestigatetheabilityofangiogenesisofthecellsinvitro．METHODS：PM- VECsfrom C57BL／6newbornmicewereculturedwithperipheralpulmonarytissuepastedmethod．Thecellswereobserved underinvertedphase—contrastmicroscopeand identifiedbyimmunocyt0chemicalandimmunofluorescentmethods．PM— VECswereseededatthedensityof20000 cellsperwellin96——wellplateontopofgrowthfactor——reducedmatrigeland incubatedfor24 hat37oC in5％ CO2．Theplateswereexaminedevery2hfortubeformationu