小鼠白蛋白基因启动子的克隆及其在不同细胞系中转录活性的检测.pdfVIP

主旦 理生理盘志 ChineseJournalofPathophysiology 2009，25(7)：1365—1369 · 1365 · [文章编号] 1000—4718(2009)07—1365—05 小鼠白蛋 白基因启动子的克隆及其在不 同 细胞系中转录活性的检测球 刘 瑶， 林菊生 ， 常 莹， 张 强， 何星星 (华中科技大学同济医学院附属武汉同济医院肝病研究所，湖北 武汉430030) [摘 要] 目的：对比小鼠白蛋白(mousealbuminpromoter，ALB)启动子调控下的增强型绿色荧光蛋白(en— hancedgreenfluorescentprotein，EGFP)在不同细胞系中的转录活性。方法：以小鼠全血基因组DNA为模板，聚合酶 链反应 (polymerasechainreaction，PCR)扩增 ALB启动子序列 ，克隆至pEGFP一1中，构建重组体pALB—EGFP；在 Lipofectamine介导下将pALB—EGFP、pEGFP—N1转染人胎肝细胞L02、人宫颈癌细胞HeLa、人结肠癌细胞SW480、 人胰腺癌细胞 Bxpc一3；荧光显微镜和流式细胞仪对各转染细胞中EGFP的表达进行检测。结果：pALB—EGFP构 建成功 ；L02转染pALB—EGFP72h后 ，ALB启动子可起始EGFP的表达，转录活性为人巨细胞病毒 (cytomegalovir— US，CMV)启动子的1／4，其它转染细胞的ALB不能起始 EGFP的转录；稳定筛选后 ，ALB的转录活性达到与CMV相 当的水平。结论 ：构建的重组载体在肝脏来源细胞中具有较高的转录活性，为建立肝脏特异性表达 目的基因的转 基因小鼠模型奠定了基础。 [关键词] 白蛋白类；启动子；肝 [中图分类号] R735．7 [文献标识码] A Cloningofmousealbumin genepromoterandassay0fitstranscriptional activityindifferentcelllines LIUYao，LINJu—sheng，CHANGYing，ZHANGQiang，HEXing—xing (InstituteofLiverDiseases，AffiliatedTon iHospitalofToniMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTech— nology，Wuhan430030，China．E—mail：fllin@驰．tjmu．edu．ca) [ABSTRACT] AIM：Tostudythetissue—specificfunctionofalbumin(ALB)indifferentcelllines．METH- ODS：TotalDNAwasextractedfrom mousebloodforPCRamplificationofALBpromoter．Theamplifiedfragmentswerein． sertedintothemultiplecloningsitesofpMD一18Tvectorandidentifiedusingrestrictionenzymedigestionandsequencing， thenclonedintotheexpressionvectorpEGFP一1．pALB—EGFPanditscontrolpEGFP—N1wastransfectedintothecell linesofL02，HeLa，SW480andBxpc一3byLipofectamine2000，respectively．TheexpressionsofEGFP weredetected usingfluorescencemicroscopyandquantitativelywithflow cytometry．RESULTS：ALBpromoterwassuccessfullycloned intotheexpressionvectorpEGFP一1．ALBpromoterdroveEGFP