原核表达和制备EB病毒GST／BFRF3融合蛋白用于鼻咽癌的诊断筛查.pdfVIP

中国病理生理杂志 ChineseJournalofPathophysiology 2013，29(6)：1147-1152 · 1147 · [文章编号】 1000-4718(2013J06-1147-06 · 实验技术 · 原核表达和制备EB病毒 GST／BFRF3融合蛋白 用于鼻咽癌的诊断筛查球 胡 波 ， 陈忠城 ， 王东宁 ， 李 林 (中山大学附属第三医院 检验科，血液内科 ，广东 广州510630) [摘 要】 目的：构建表达EB病毒衣壳抗原BFRF3基因的原核细胞表达载体并探讨其在鼻咽癌血清学诊 断中的应用。方法：以EB病毒DNA为模版，采用PCR法扩增 目的基因BFRF3，与原核表达载体PGEX-5X·1连 接 ，构建PGEX-5X-BFRF3重组质粒 ，转化大肠杆菌 BL21(DE3)，IPTG诱导表达GST／BFRF3融合蛋白。表达产物 经 SDS和免疫印迹法鉴定后，纯化 目的蛋 白作为包被抗原，制备ELISA试剂检测鼻咽癌患者和正常人群 BFRF3一IgA抗体。结果：在大肠杆菌中成功地表达了GST／BFRF3融合蛋白，相对分子质量为44kD，免疫印迹证实 目的蛋白带有免疫原性，目的蛋白经纯化后作为包被抗原检测鼻咽癌患者的灵敏度和特异度分别为65％和87％。 结论 ：采用原核表达系统成功构建并表达了Gr／BFR乃融合蛋白，其在鼻咽癌血清筛选中具有诊断价值。 [关键词] 鼻咽肿瘤；EB病毒衣壳抗原；原核表达 [中图分类号] R365 [文献标志码] A d0i：10．3969／j．issn．1000-4718．2013．06．033 ProkaryoticexpressionandpreparationofGST／BFRF3fusionproteinof Epstein-Barrvirusforscreeningnasopharyngealcarcinomas HU B0 ，CHEN Zhong—cheng ，WANG Dong-ning2 LILin 、 ， (DepartmentofLaboratoryMedicine，DepartmentofHematology，TheThirdAffiliatedHospitalofSunYat—seRUniversity， Guangzhou510630，China．E-mail：lilin5786@263．net) [ABSTRACT] AIM：ToconstructaprokaryoticexpressionplasmidcontainingEpstein-BaITviral(EBV)capsid antigenBFRF3genenadtoobservethe印plieationofrecombinantBFRF3proteinintheserologicaldiagnosisofnasopha- ryngealcarcinoma(NPC)．METHODS：DNAextractedfromtheB95-8cellswasusedashtetemplates．Polymerasechain reaction(PCR)WasusedtogenerateaDNAfragmentofBFRF3gene，nada531-bpDNAfragmentWasinsertedintoa PGEX-5X-1vector．TherecombinantplasmidWastransformedintoE coliBL21(DE3)．TheexpressionofGST／BFRF3 fusionproteinWas inducedbyIPTG，identifide bybothSDS—P