微透析-高效液相色谱法测定大鼠脑脊液中4种氨基酸的含量测定.pdfVIP

维普资讯 堡生理盘壹 ! 』0u Path0physiol0gy2007，23(9)：1871—1872 · 1871 · [文章编号] 1000—4718(2007)09—1871—02 微透析 一高效液相色谱法测定大鼠脑脊液 中4种氨基酸的含量测定 韩 进 ，万海同 ， 别晓东 ， 李金辉 ， 张宇燕 (浙江中医药大学脑血管病研究所 ，浙江 杭州 310053；浙江大学第二附属医院，浙江 杭州 310009) [摘 要] 目的：通过对大鼠脑透析液中氨基酸的含量测定，为在体氨基酸分析建立方法。方法：利用微透 析技术抽取麻醉下大鼠脑脊液，运用 OPA柱前衍生法处理样品，再用高效液相二元梯度洗脱色谱法，BDSC，。柱 (Hypersil，4．6mmx250．0mm，5 m)，荧光检测脑脊液中谷氨酸、天门冬氨酸、一氨基丁酸、牛磺酸等4种氨基酸 的含量。结果：该体系可在30min内对脑脊液中4种氨基酸实现良好的分离，4种氨基酸在0．625—10txmol／L浓 度范围内与色谱峰面积线性关系良好，保留时间分别是天门冬氨酸4．392min、谷氨酸5．5 min、牛磺酸 13．625min、 一 氨基丁酸 14．833min。结论 ：本方法准确、灵敏、方便、重复性好，可用于微透析样品中氨基酸的含量测定。 [关键词] 高效液相色谱法 ；微透析；脑脊髓液 [KEYWORDS] High—powerliquidchromatography；Microdialysis；Cerebmsplnalfluid [中图分类号] R363 [文献标识码] A 脑脊液中一些游离氨基酸的含量测定对于某些疾病的 箱保存，人 工脑脊液 (mmo1)(ASCF：NaCI125，KCI5， 诊断和治疗有重要的意义。近年来，用高效液相色谱一荧光 NaH2PO41．2，MgSO42，NaHCO325．7，CaC12 ·H2O 2，glucose 检测法分析脑组织和脑脊液中的氨基酸已有不少报道 0J。 10，pH=7．4)稀释成5i~mol／L的工作液。 但利用微透析技术直接从动物脑组织特定区域内抽取透析 4 标准溶液的配制 液，并用高效液相色谱仪同时测定其中4种神经递质的氨基 精密量取天门冬氨酸、谷氨酸‘、牛磺酸、 一氨基丁酸标 酸：天冬氨酸(Asp)、谷氨酸 (Glu)、牛磺酸(Tau)和 一氨基 准品，配成不同浓度的氨基酸标准品 (各含 10I~mol·L～、 丁酸(GABA)的方法报道不多。本实验采用微透析和高效液 5tunol·L一，25tunol·L一，1．25tunol·L一，Q625tunol·L一) 相相结合对体内氨基酸的变化进行测定，为临床应用提供一 的混合溶液。 种有效的分析方法。 5 透析样品的制备 雄性 sD大鼠以水合氯醛(400mg,／kg)腹腔麻醉，固定在 材 料 和 方 法 立体定位仪上，将透析套管定位于右侧纹状体 (前囟前 0．2mm，旁开3．5mm，皮层下5．2nlln)并用小螺钉固定。开 1 仪器与试剂 启透析灌流系统 ，调节恒流泵控制液流速 3．0 ·min～，透 岛津 LC一10ADVP高效液相色谱仪 ，RF一10AXL荧光检 析探针与人工脑脊液灌流系统直接相接。灌流平衡 120min 测器，岛津色谱工作站，分析柱：BDSC1。柱 (Hypersil，4．6mm 后 ，每 15min收集 1管，每管30 ，共收集8管透析液。收 x250．0nlln，5 m)；微透析设备与系统：Beekeeper啮齿类动 集的透析液立即放人一20℃冰箱保存 。 物容器与旋转接头系统(BAS，MD一1575，USA)，微量注射泵